NF-κB炎癥信號(hào)通路靶向封閉防治急性創(chuàng)傷性肺損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景:國(guó)內(nèi)外關(guān)于 ALI/ARDS的研究大多數(shù)集中于探討細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的失衡,盡管使用各種藥物針對(duì)細(xì)胞因子進(jìn)行了大量的臨床防治,但始終沒(méi)有一種完全有效、可重復(fù)、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的方法。ALI是一種炎癥免疫信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)紊亂引起的疾患。當(dāng)機(jī)體受到創(chuàng)傷、休克等損傷時(shí),肺是首先被攻擊的靶器官和細(xì)菌來(lái)源之一。而肺泡巨噬細(xì)胞是肺組織炎癥瀑布效應(yīng)的激活點(diǎn)。核因子κB(NF-κB)是核轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白的一種,具有多向調(diào)節(jié)的特點(diǎn);參與多種炎性介質(zhì)基因和及多種免疫相關(guān)基

2、因的轉(zhuǎn)錄和調(diào)控,是炎癥免疫反應(yīng)中多個(gè)信號(hào)途徑的匯聚點(diǎn)。本課題組前期研究證實(shí)NF-κB的核移位是誘導(dǎo)炎癥基因表達(dá)的關(guān)鍵環(huán)節(jié),并在失控性炎癥反應(yīng)(SIRS)和急性肺損傷(ALI)的病理機(jī)制中發(fā)揮關(guān)鍵作用。但目前拮抗 NF-κB活化通路、抑制炎癥損傷尚無(wú)特效藥物和成熟手段。
　　目的:為創(chuàng)傷性ALI篩選精確的基因藥物靶點(diǎn),尋求一種高效、副作用小的炎癥靶向控制方法和尋求高效合理的治療方案提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　方法:本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用

3、已成功建立的家兔ALI模型,選定NF-κB信號(hào)通路的關(guān)鍵環(huán)節(jié)為突破口,利用載體/藥物技術(shù),對(duì)體內(nèi)外炎癥效應(yīng)細(xì)胞(如肺泡巨噬細(xì)胞)的NF-κB核移位識(shí)別目的基因κB序列的―瓶頸‖通路進(jìn)行特異性靶向封閉;并用分子生物學(xué)、免疫學(xué)和形態(tài)學(xué)等方法證實(shí)靶向封閉炎癥信號(hào)通路、調(diào)控炎癥基因表達(dá)防治SIRS/ALI的可行性和有效性。
　　結(jié)果:體外實(shí)驗(yàn):脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的雙鏈寡聚脫氧核苷酸(dsODNs)能有效降低肺泡巨噬細(xì)胞中炎癥介質(zhì) IL-1α、IL

4、-6、IL-10、TNF-α和 VCAM的mRNA表達(dá)和肺泡巨噬細(xì)胞培養(yǎng)液中 LDH的含量(P<0.01);dsODNs-decoy/脂質(zhì)體為1:5時(shí)轉(zhuǎn)染效率最高,轉(zhuǎn)染6小時(shí)后細(xì)胞攝取率最高。為體內(nèi)試驗(yàn)的順利進(jìn)行奠定了基礎(chǔ)。
　　體內(nèi)試驗(yàn):雙鏈寡聚脫氧核苷酸(dsODNs-decoy)能有效減少肺組織的炎癥介質(zhì)IL-1α、IL-6、IL-10、TNF和VCAM的mRNA表達(dá),dsODNs-decoy組與對(duì)照組和錯(cuò)配 dsODNs-

5、decoy組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;血清 LDH檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組明顯減少(p<0.01);HE染色顯示對(duì)照組和錯(cuò)配 dsODNs-decoy組中肺泡變形、融合,大小不一;掃描電鏡顯示對(duì)照組和錯(cuò)配 dsODNs-decoy組肺泡隔增粗、增厚,肺泡隔不完整、斷裂。Western blot顯示 dsODNs-decoy組中 NF-κB p65核移位明顯減少。
　　結(jié)論:體外實(shí)驗(yàn)中脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染 dsODNs-decoy具有較高的轉(zhuǎn)染效率,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的d