MiRNALet-7在氡致大鼠肺損傷中的表達改變.pdf

1、目的：探討miRNA Let-7在氡致大鼠肺損傷中的作用,為氡致肺癌的分子機制提供實驗資料。
　　方法：⑴雄性Wistar大鼠吸入染毒后,檢測 Let-7在氡致大鼠肺組織損傷中的表達情況。組織病理學HE染色觀察大鼠肺組織病理學改變;提取大鼠肺組織RNA,Real-time PCR檢測肺組織中 Let-7家族的表達水平;并篩選出兩個亞類(Let-7a-2-3p和Let-7b-3p)。生物信息學方法預測Let-7a-2-3p和Let-

2、7b-3p的靶基因,并檢測其表達水平。⑵采用人支氣管上皮細胞(Human bronchial epithelia, HBE)進行氡染毒,流式細胞術(shù) DCFH-DA熒光探針測定細胞內(nèi)活性氧(Reactive oxygen species, ROS);JC-1熒光探針測定線粒體膜電位(Mitochondrial membrane potential, MMP);PI單染法分析細胞周期分布。提取細胞RNA,采用Real-time PCR檢測

3、Let-7a-2-3p和 Let-7b-3p在氡染毒細胞中的表達情況及靶基因表達水平。⑶將Let-7a-2-3p和 Let-7b-3p分別轉(zhuǎn)染至 HBE細胞后進行氡染毒,流式細胞術(shù)DCFH-DA熒光探針測定ROS;JC-1熒光探針測定MMP;PI單染法分析細胞周期。提取細胞RNA,Real-time PCR檢測Let-7a-2-3p和Let-7b-3p靶基因的表達情況。
　　結(jié)果：①大鼠肺組織病理結(jié)果,與正常對照組相比,可見氡染毒

4、組肺間質(zhì)充血水腫,肺泡間隔增厚,炎癥細胞浸潤,肺泡腔逐漸萎縮變小。Let-7a-2-3p、Let-7b-3p、Let-7b-5p表達隨氡染毒劑量的增加而降低,具有統(tǒng)計學意義。Let-7a-1-3p、Let-7a-5p表達下降,但差異不顯著。靶基因預測交集顯示其靶基因為K-ras基因,其 mRNA表達隨氡染毒劑量的增加而增加。Pearson分析結(jié)果K-ras與Let-7a-2-3p、Let-7b-3p表達呈負相關(guān)。②氡染毒HBE細胞后,隨

5、著染毒劑量的增加,ROS水平降低,MMP升高,細胞周期阻滯于G1期。Let-7a-2-3p、Let-7b-3p表達隨氡染毒劑量的增加而顯著降低,其靶基因K-ras mRNA表達隨氡染毒劑量的增加而增加,并具有統(tǒng)計學意義。③將Let-7a-2-3p與Let-7b-3p轉(zhuǎn)染至HBE細胞,并進行氡染毒,建立了Let-7過表達的細胞模型。Let-7過表達后染氡細胞ROS和MMP水平顯著降低。G1期延長,S期縮短,G2/M期縮短,靶基因K-ras