創(chuàng)傷致大鼠肺損傷的實驗研究.pdf

1、背景與目的：創(chuàng)傷是醫(yī)學中最古老的課題，可以說有人類就有創(chuàng)傷，肺是創(chuàng)傷后最易受損的器官之一，常表現(xiàn)為急性肺損傷，嚴重時發(fā)生肺水腫，甚至會危及生命。 手術(shù)創(chuàng)傷是特殊類型的創(chuàng)傷，肺損傷、肺水腫是手術(shù)后常見的并發(fā)癥，術(shù)后肺損傷與手術(shù)創(chuàng)傷本身有直接的關(guān)系。目前關(guān)于遠隔臟器創(chuàng)傷后反應(yīng)性肺損傷的病理生理機制尚未完全闡明，可能與創(chuàng)傷后炎癥反應(yīng)、神經(jīng)體液因子的激活、免疫紊亂等多種因素有關(guān)。 本實驗應(yīng)用大鼠左下肢截肢模型，觀察手術(shù)創(chuàng)傷后肺損

2、傷病理改變，觀察炎性細胞因子、氧化-抗氧化體系、肺泡表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白、鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶及內(nèi)源性血漿硫化氫(H2S)/肺胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)體系、能量代謝等方面的變化，較全面研究創(chuàng)傷后肺損傷的發(fā)病機制。并應(yīng)用H2S供體NaHS、CSE抑制劑炔丙基甘氨酸(PPG)、免疫抑制劑他克莫司(Tacrolimus，F(xiàn)K-506)、醛固酮受體拮抗劑螺內(nèi)酯進行干預，進一步研究H2S/CSE系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)對創(chuàng)傷后肺

3、損傷的影響。 本實驗分為兩部分：一、研究手術(shù)創(chuàng)傷后肺損傷的發(fā)病機制及干預對創(chuàng)傷致大鼠肺損傷的影響；二、創(chuàng)傷對肺線粒體能量代謝的影響。 方法：本實驗應(yīng)用大鼠左下肢截肢模型。第一部分實驗分組：雄性Wistar大鼠91只，按照手術(shù)后不同時間點分為：正常對照組、手術(shù)后1h組(B1)、2h(B2)、4h(B4)、6h(B6)、12h(B10)、24h(B24)、48h(B48)、72h組(B72)；另按干預分為4組：分別給予NaH

4、S、PPG、FK-506、螺內(nèi)酯干預；術(shù)后6小時處死(處死時間點由預實驗結(jié)論得來)。每組7只。 觀察各組大鼠肺病理改變、血H2S、髓過氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)、血管緊張素Ⅱ(AgⅡ)、醛固酮(ALD)、NO、IL-6水平的變化，同時檢測各組大鼠肺CSE活性、MPO、 MDA及IL-6的含量與水平。應(yīng)用RT-PCR檢測SP-A、SP-D、CaN-α mRNA表達。 第二部分實驗分組：雄性SD大鼠48只，分為：正

5、常對照組、手術(shù)后6h組(B6)；干預組4組：分別給予NaHS、PPG、FK-506、螺內(nèi)酯干預；術(shù)后6小時處死，每組8只。觀察肺線粒體呼吸功能、膜電位、ATP酶活性的變化。 結(jié)果：與正常組比較，截肢術(shù)后1小時起，各組肺泡間隔增寬，不同程度充血、水腫、炎細胞浸潤；截肢術(shù)后6小時損傷最重，截肢術(shù)后24小時損傷程度開始明顯減輕，至創(chuàng)傷后72小時基本恢復正常。NaH/S干預組肺泡間隔增寬、充血水腫、炎細胞浸潤似有加重傾向；PPG、FK-

6、506干預組損傷程度減輕；螺內(nèi)酯干預組變化不明顯。 與正常對照組比較，創(chuàng)傷組血漿MPO、MDA、IL-6濃度變化呈現(xiàn)先升高后逐漸下降趨勢，血漿H2S濃度變化則先下降后升高。肺MPO、MDA、IL-6濃度變化與血漿基本相似，CSE活性變化近似于血漿H2S濃度變化。W/D比值先升高后下降，提示創(chuàng)傷后大鼠出現(xiàn)肺水腫，并且隨時間推移不斷變化。創(chuàng)傷后SP-A、SP-D mRNA表達下降，CaN-αmRNA表達升高，提示創(chuàng)傷后存在免疫紊亂及

7、鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶變化。 與正常對照組比較，創(chuàng)傷組肺線粒體呼吸功能、膜電位、ATP酶活性均出現(xiàn)明顯下降。FK-506、NaHS干預對創(chuàng)傷后肺線粒體有保護作用。 干預后指標變化提示PPG、FK-506干預可能對創(chuàng)傷后肺損傷有保護作用。NaHS干預可能加重創(chuàng)傷后肺損傷。螺內(nèi)酯干預未見明確的保護或損傷作用。 結(jié)論：手術(shù)創(chuàng)傷可造成大鼠肺損傷，創(chuàng)傷后4-6小時，肺損傷最重。炎細胞的聚集活化、全身及肺局部炎性細胞因子的激活、過度