Toll樣受體5在鞭毛蛋白致大鼠急性肺損傷中的表達及其作用研究.pdf

1、急性肺損傷(acutelunginjury，ALI)是由多種肺內(nèi)外致病因素導致的以進行性呼吸困難為主要臨床表現(xiàn)的急性呼吸衰竭，其發(fā)病機制非常復雜，病死率高達50％-70％，迄今為止尚無特效的治療措施。Toll樣受體5(Toll-likereceptor5，TLR5)是機體免疫系統(tǒng)中一類重要的跨膜受體Toll樣受體(Toll-likereceptors，TLRs)家族成員，它是鞭毛蛋白的特異性受體。鞭毛蛋白是G-細菌鞭毛的主要結(jié)構(gòu)蛋白。目

2、前認為，鞭毛蛋白具有強致炎作用，可通過TLR5引起局部或全身炎癥反應。它也是膿毒癥急性肺損傷的潛在致病因子之一。但鞭毛蛋白誘導急性肺損傷的途徑及機理尚未見文獻報道。本實驗通過注射純化鞭毛蛋白復制大鼠急性肺損傷模型，觀察肺組織TLR5表達及NF-κB活性變化，以期探討TLR5在鞭毛蛋白致急性肺損傷中的作用及其信號轉(zhuǎn)導途徑。 實驗方法：用酸裂解法從大腸桿菌分離出粗制鞭毛蛋白，并經(jīng)除鹽、弱陰離子交換，獲得純化的鞭毛蛋白。用其經(jīng)尾靜脈注

3、射復制大鼠急性肺損傷模型。實驗分為正常對照組(注射生理鹽水)、致傷1組(注射鞭毛蛋白50μg/Kg)和致傷2組(注射鞭毛蛋白500μg/Kg)。各組分別在致傷后0h、0.5h、1h、2h、4h、6h時相點，采用原位雜交(insituhybridization，ISH)技術(shù)檢測肺組織TLR5mRNA表達，通過凝膠電泳遷移率試驗(electrophoreticmobilityshiftassay，EMSA)檢測核提取物中NF-κB活性，并觀

4、察動脈血氧分壓(partialpressureofoxygeninartery，PaO2)、肺濕干比值(wet/dryratio，W/D)的變化和肺組織病理學改變。 實驗結(jié)果：(1)純化的鞭毛蛋白經(jīng)SDS-PAGE電泳，分子量約為65KD。(2)純化的鞭毛蛋白經(jīng)WesternBlotting檢測，在65KD處見到清楚的蛋白條帶。(3)采用靜脈注射鞭毛蛋白的方法，可成功地復制大鼠急性肺損傷模型。在致傷過程中，①兩致傷組PaO21h

5、后顯著低于對照組(P＜0.05或P＜0.01)，并呈進行性下降。②肺W/D比值1h后顯著高于對照組(P＜0.05或P＜0.01)，并呈進行性升高。③肺組織TLR5mRNA從1h后開始檢測到表達，其水平隨時間和鞭毛蛋白劑量升高。④肺組織NF-κB活性1h后顯著高于對照組(P＜0.05或P＜0.01)。⑤肺組織病理學改變：致傷1組2h后和致傷2組1h后出現(xiàn)肺間質(zhì)、肺泡水腫和炎性細胞浸潤等病理改變。 結(jié)論：(1)本實驗分離純化的蛋白，