血管緊張素Ⅱ及其受體在大鼠內毒素性急性肺損傷中的作用.pdf

1、研究背景 腎素一血管緊張素系統(tǒng)(RAS)與血管內皮損傷過程密切相關，其主要效應分子血管緊張素II(AngⅡ)有顯著的促血管內皮炎性損傷作用。感染是急性肺損傷(ALl)最常見的病因，已知革蘭陰性(G-)菌內毒素(LPS)在嚴重感染時可致肺微血管內皮通透性增高，進而形成肺水腫；同時LPS還激活循環(huán)和肺組織的RAS，導致AngII水平升高，據此我們推測AngII可能參與LPS致ALl的發(fā)生、發(fā)展過程。在各種原因所致ALl中，肺微血管內

2、皮細胞(PMVEC)的損傷首先出現(xiàn)，為進一步闡明AngⅡ對PMVEC的作用機制，我們探討AngⅡ受體在大鼠肺微血管內皮細胞(RPMVEC)的分布及調控特征，并進一步研究AngⅡ及其受體在大鼠內毒素性ALI病理過程中的作用。 研究內容 本研究分兩個階段。實驗第一階段在體外成功分離、培養(yǎng)RPMVEC的基礎上進行，內容包括：(1)采用RT-PCR、Westernblot和放射性配基結合分析法，分別檢測AngII受體的mRNA、

3、蛋白表達水平以及受體的結合活性；(2)觀察以LPS／AngII干預RPMVEC之后，AngII受體mRNA和蛋白表達水平的變化。 實驗第二階段分別在大鼠的內毒素性ALI模型以及RPMVEC中進行，內容包括： (1)測定內毒素性ALl大鼠肺組織中AngⅡ水平；(2)在LPS致大鼠ALI模型上以①肺組織濕／干重比；②組織病理學檢查；③伊文思藍(EB)熒光定量的方法，分別觀測LPS和／或AngⅡ對大鼠肺組織微血管內皮通透屏障的

4、影響，以及AngⅡ受體拮抗劑的干預作用；(3)在RPMVEC單層水平上分別觀察LPS和／或AngⅡ對單層通透性的影響，以及AngⅡ受體拮抗劑的干預作用；(4)應用流式細胞儀和激光共聚焦顯微鏡技術，進行定量分析及形態(tài)學研究，觀察LPS和／或AngⅡ對RPMVEC細胞骨架結構F-actin的影響，以及AngII受體拮抗劑的干預作用。 結論 (1)RPMVEC存在AT1-R，無AT2-R分布。 (2)AngI工以濃度一

5、時間依賴的方式下調RPMVEC上ATl-RmRNA表達水平；10-VM的AngII作用RPMVEC后，ATl-R蛋白表達水平也顯著降低。表明外源性AngII對AT1-R有下調作用。 (3)LPS以濃度依賴的方式上調ATl-RmRNA表達水平。以LPS(10μg/m1)處理RPMVEC后，ATl-R蛋白表達水平也顯著增高。表明LPS對ATl-R有上調作用。 (4)LPS可致大鼠肺組織濕／干重比、肺微血管蛋白滲出量顯著增高，

6、給予ATl一R拮抗劑[Sar1，I1e8]AngH干預對上述變化有明顯的緩解作用。 (5)大鼠內毒素性ALI模型中肺組織AngⅡ水平增高。 (6)在體外培養(yǎng)的RPMVEC單層上，LPS表現(xiàn)出對細胞的直接毒性作用，可引起細胞單層滲透系數K，顯著增加，ATl-R拮抗劑對LPS誘導的內皮細胞單層通透性損傷有保護作用。 (7)AngⅡ不僅對LPS的致通透性損傷作用具有協(xié)同效應，而且可單獨引起RPMVEC單層通透系數Kf增