低劑量甲氨蝶呤通過阻斷NF-κB路徑抑制肝臟炎癥.pdf

1、許多所謂難治性疾病其實(shí)質(zhì)是由炎癥所導(dǎo)致的機(jī)體組織損傷。乙型肝炎的發(fā)病機(jī)制,也是由于機(jī)體免疫系統(tǒng)引發(fā)的炎癥對(duì)肝細(xì)胞的損傷。巨噬細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要細(xì)胞成份,分泌多種促炎因子并參與免疫應(yīng)答。甲氨蝶呤(MTX)是一種葉酸拮抗劑,近來有研究表明,低劑量的MTX廣泛用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等自身免疫性疾病的治療,在糖尿病腎病中亦有抗炎作用。
　　本文用刀豆蛋白A(conA)誘導(dǎo)小鼠急性肝炎,用0.5μg/gMTX處理之,可減輕小鼠肝損傷程度、

2、降低小鼠血清ALT的活性,并抑制肝臟kupffer細(xì)胞iNOS的mRNA表達(dá)。通過清除巨噬細(xì)胞及使用iNOS的抑制劑,亦可降低小鼠血清ALT活性;1.0ug/mlLPS和0.1ug/mlMTX共培養(yǎng)48小時(shí)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞,其培養(yǎng)上清中NO含量較低。體內(nèi)(0.5μg/gMTX)和體外(0.1μg/mlMTX)實(shí)驗(yàn)均表明,低劑量的MTX能抑制巨噬細(xì)胞iNOS的活性,減少NO的產(chǎn)生。單獨(dú)使用0.5μg/gMTX處理健康小鼠,小鼠并無肝損傷

3、。由此可知,低劑量的MTX(0.5μg/g)治療可在不產(chǎn)生肝毒性的情況下,通過抑制kupffer細(xì)胞的iNOS的活性,減少NO產(chǎn)生,防止肝損傷。
　　隨后本文深入研究,通過體外實(shí)驗(yàn)證明低劑量的MTX(0.1μg/ml)能有效阻止受LPS(1.0ug/ml)刺激的巨噬細(xì)胞的NF-κB(p65)入核參與調(diào)控。并通過westernblot進(jìn)一步證明,低劑量的MTX(0.1μg/ml)是通過抑制IκB的磷酸化及降解,來阻止NF-κB入核。

4、
　　隨后本文擴(kuò)展研究,構(gòu)建荷瘤小鼠模型,從接種腫瘤第3日起,每日腹腔注射MTX。低劑量的MTX(0.04μg/g)的治療能在一定程度上抑制腫瘤的生長;且停藥后小鼠存活時(shí)間較高濃度MTX治療組長。腫瘤細(xì)胞RT-PCR和ELISA結(jié)果均顯示,低劑量的MTX(0.04μg/g)治療組小鼠腫瘤組織的炎性細(xì)胞因子IL-6表達(dá)下調(diào);westernblot結(jié)果也表明,低劑量的MTX(0.04μg/g)能有效抑制IκB的降解以阻斷NF-κB的核