胰島素對內毒素、chemerin激活肝臟NF-κB炎癥通路的影響.pdf

1、目的:臨床水平研究細菌性肝膿腫患者血漿胰島素水平與炎癥指標及糖脂代謝、肝功能指標的相關性，基礎水平研究胰島素對LPS、chemerin干預肝細胞的抗炎機制，為臨床炎癥感染應用胰島素抗炎治療提供初步的理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.選取198例細菌性肝膿腫病例，按有無合并非酒精性脂肪性肝病分為合并非酒精性脂肪性肝病組（A組）和未合并非酒精性脂肪性肝病組（B組），其中A組以有無2型糖尿病分為亞組即非酒精性脂肪肝不合并2型

2、糖尿病組(A1組)、非酒精性脂肪肝合并2型糖尿病組（A2組），B組以有無2型糖尿病分為亞組即不合并2型糖尿病組（B1組），合并2型糖尿病組（B2組），檢測空腹胰島素(Fins)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、血糖、血脂，計算四組人數(shù)疾病構成比胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)。將研究對象的胰島素水平由低到高按四分位法分為胰島素極低組（1組）、胰島素低下組（2組）、胰島素中間水平組（3組）及胰島素高水平組（4組），檢測四組Fins、HbA1c

3、、血糖、血脂、肝功能、血沉(ESR)、內毒素(LPS)、C反應蛋白(CRP)水平，計算HOMA-IR及肝/脾CT值，分析胰島素水平與各相關指標的關系。
　　 2.體外培養(yǎng)肝癌細胞株HepG2，通過倒置顯微鏡觀察形態(tài)學變化。將培養(yǎng)的肝細胞隨機分為16組:(1)正常對照組(2) LPS損傷組(3) LPS+2.5IU/ml胰島素干預組(4) LPS+5IU/ml胰島素干預組(5) LPS+10IU/ml胰島素干預組(6) cheme

4、rin損傷組(7) chemerin+2.5IU/ml胰島素干預組(8)chemerin+5IU/ml胰島素干預組(9) chemerin+10IU/ml胰島素干預組(10) LPS+chemerin損傷組(11)LPS+chemerin+2.5IU/ml胰島素干預組(12) LPS+chemerin+5IU/ml胰島素干預組(13)LPS+chemerin+10IU/ml胰島素干預組(14)2.5IU/ml胰島素對照組(15)5IU/

5、ml胰島素對照組(16)10IU/ml胰島素對照組，分別干預6h、12h、24h。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定各組細胞培養(yǎng)上清液中的腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素-6(IL-6)及細胞裂解液中核因子-κB(NF-κB)、核轉錄因子κB抑制蛋白α(IκBα)的表達情況;采用流式細胞術測定各組細胞細胞膜表面的TLR-4的表達情況。
　　 結果:
　　 1.細菌性肝膿腫患者中A組與B組的人數(shù)構成比分別為27.9

6、2％和72.08％，其中A1組:19例(9.6％);A2組:36例(18.27％); B1組:58例(28.93％);B2組:85例(43.15％)。按胰島素水平四份位法分為4組后，1組、2組、3組、4組ESR水平分別為（69.96±12.59 vs46.87±12.40 vs43.67±12.22 vs44.90±7.98）mm/h，CRP水平分別為(92.68±22.47 vs84.40±22.64 vs50.64±16.93 vs

7、61.30±19.83)pg/ml，內毒素水平分別為（6.91±1.28 vs8.08±1.52 vs2.86±1.52 vs3.62±1.52）pg/ml，Pearson相關分析表明Fins與內毒素、CRP、ESR、肝/脾CT值、AST呈線性負相關關系;多元逐步回歸分析表明肝/脾CT值、ESR、CRP是影響胰島素水平的危險因素。
　　 2.肝癌細胞株HepG2的傳代培養(yǎng)情況良好。LPS、chemerin、LPS聯(lián)合chemer

8、in干預肝癌細胞株HepG2后，NF-κB、IL-6濃度明顯較正常對照組及胰島素對照組增高，且隨著時間延長有增高趨勢，相反IκBα濃度則明顯較正常對照組及胰島素對照組降低，且隨著時間變化有降低趨勢，而TNF-α濃度無明顯變化。在加入不同濃度胰島素干預后，NF-κB、IL-6濃度隨胰島素濃度的增高而降低，相反Iκ Bα濃度則隨著胰島素濃度的增高而增高，而TNF-α濃度仍無明顯變化;正常對照組與各胰島素對照組相比，NF-κB、IκBα、IL

9、-6及TNF-α濃度無明顯差異。LPS、chemerin可上調肝癌細胞株HepG2表面TLR-4的表達，而胰島素可下調肝癌細胞株HepG2表面的TLR-4表達。
　　 結論:
　　 1.本研究通過統(tǒng)計細菌性肝膿腫患者的疾病構成比發(fā)現(xiàn)細菌性肝膿腫患者中約43.15％合并2型糖尿病，僅約9.6％合并單純脂肪肝，這是由于非酒精性脂肪性肝病因IR存在高胰島素血癥，而2型糖尿病因胰島功能減退存在低胰島素血癥所致。按胰島素水平四份位

10、法分組，細菌性肝膿腫患者血漿CRP、ESR、內毒素、ALT、AST隨胰島素水平增高而降低，白蛋白水平隨著胰島素水平的增高而增高，表明胰島素可改善細菌性肝膿腫患者炎癥狀態(tài)及肝功能。
　　 2.本研究表明LPS、chemerin可通過上調肝癌細胞株HepG2表面TLR-4的表達而激活NF-κB途徑產生炎癥反應。胰島素可通過下調肝癌細胞株HepG2表面TLR-4的表達而抑制NF-κB途徑，減少炎癥因子的產生而發(fā)揮抗炎作用，且呈濃度依賴