利拉魯肽抑制mTOR表達延緩糖尿病腎損傷的機制研究.pdf

1、糖尿病腎病(Diabetic Nephropathy，DN)是糖尿病最常見的慢性并發(fā)癥之一，微量白蛋白尿是其早期臨床表現(xiàn)，屬可逆性改變。DN病理改變包括腎小球肥大、細胞外基質增多、腎小球硬化和間質纖維化，糖代謝異常與DN發(fā)生密切相關，且近期有研究證實mTOR即哺乳動物雷帕霉素靶蛋白在DN發(fā)生中起重要作用。
　　胰升糖素樣肽1（glucagon-like peptide-1，GLP-1）作為新的降糖藥物，已用于2型糖尿?。╰ype2

2、 diabetes mellitus，T2DM）病人，證實能顯著降低糖尿病患者的血糖。但GLP-1應用于糖尿病前期人群的研究相對較少，且近年來越來越多的研究開始關注GLP-1的降糖外療效，如對大血管及微血管的保護作用等。故本課題擬開展相關研究，觀察早期應用GLP-1類似物—利拉魯肽是否能減少糖耐量受損(ImpairedGlucose Tolerance，IGT)大鼠的糖尿病發(fā)生率及是否能延緩其腎損傷。同時研究利拉魯肽是否能延緩T2DM大

3、鼠腎損傷及其機制，即證實利拉魯肽的腎保護作用是否與PI3K-AKT-mTOR通路相關。相信研究結果將為闡明利拉魯肽的腎保護作用機制，為利拉魯肽在糖尿病前期和糖尿病患者中的應用提供理論依據(jù)。
　　目的：
　　1.研究利拉魯肽對IGT大鼠腎損傷的保護作用。
　　2.研究利拉魯肽對T2DM大鼠腎損傷的保護作用3.研究利拉魯肽延緩糖尿病腎損傷的可能機制。
　　方法：選擇4周齡的SD大鼠，適應性飼養(yǎng)1周后隨機分為高脂飼料組

4、和普通飼料組。予高脂飼料喂養(yǎng)8周后，分別腹腔注射10mg/kg和20mg/kg的鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)，構建IGT大鼠及T2DM大鼠模型。建模成功后，IGT大鼠隨機分為IGT對照組、利拉魯肽治療組，并設立正常對照組;T2DM大鼠隨機分為糖尿病對照組，胰島素治療組和利拉魯肽治療組，同樣設立正常對照組。實驗期間每周檢測血糖和體重，高脂喂養(yǎng)8周、IGT大鼠干預5周和糖尿病干預5周后分別行口服葡萄糖耐量實驗(Oral

5、 glucose tolerance test，OGTT)以評估胰島功能情況，并測血脂、血尿素、血肌酐、胱抑素C和尿白蛋白/肌酐比值等指標;大鼠處死后留腎臟組織，行HE染色及電鏡檢測，觀察腎組織形態(tài)學改變;行Masson染色，觀察腎組織纖維化情況;免疫組化檢測大鼠腎組織轉化生長因子β1（transforming growth factorβ1，TGFβ1）、結締組織生長因子（connective tissue growth factor

6、，CTGF）和血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表達情況;Western Blot法檢測腎組織mTOR和P70S6k蛋白表達情況;實時定量逆轉錄酶聚合酶鏈反應檢測法(Relative quantification in real time reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測腎組織mTOR、CTG

7、F、VEGF和NOX-4 mRNA的表達情況。研究利拉魯肽早期干預是否能延緩糖尿病的發(fā)生及改善IGT大鼠的腎損傷;利拉魯肽是否通過抑制mTOR通路，延緩T2DM的腎損傷。
　　結果：
　　1.高脂喂養(yǎng)8周后，與普通飼料組大鼠比，高脂飼料組大鼠甘油三脂水平升高，體重及雙側附睪脂肪重量均明顯增高（均P＜0.01）;
　　2.與IGT對照組相比，利拉魯肽治療組大鼠體重、雙腎/體重比值、雙側附睪脂肪/體重比值、血糖、總膽固醇及

8、甘油三脂水平均明顯減低（均P＜0.05）;
　　3.與胰島素治療組相比，T2DM利拉魯肽治療組大鼠體重、雙腎/體重比值、雙側附睪脂肪/體重比值、血糖、總膽固醇、甘油三脂、低密度脂蛋白、胱抑素C及尿白蛋白/肌酐比值均明顯降低（均P＜0.05）;
　　4.T2DM大鼠腎小球肥大、系膜細胞明顯擴張，且足細胞數(shù)量明顯減少;但利拉魯肽治療后腎小球肥大和系膜細胞擴張情況明顯好轉，足細胞數(shù)量明顯增多;
　　5.免疫組化研究證實，與糖

9、尿病對照組及胰島素治療組相比，利拉魯肽治療組腎組織TGF-β1、CTGF及VEGF表達明顯減少;
　　6.與胰島素治療組相比，利拉魯肽治療組腎組織的p-mTOR和p-p70S6k蛋白的表達明顯減少，且腎組織CTGF、VEGF及NOX-4 mRNA的表達也明顯降低。
　　結論：糖耐量受損大鼠已出現(xiàn)輕度的腎臟病理學改變，而早期應用利拉魯肽干預可延緩糖耐量受損大鼠進展為糖尿病，并改善其腎損傷。研究發(fā)現(xiàn)利拉魯肽在降糖同時，可明顯改善