利拉魯肽對2型糖尿病非酒精性脂肪肝的作用及機制研究.pdf

1、目的:胰高糖素樣肽-1(glucagon-like peptide1，GLP-1)是一個含有30個氨基酸殘基的腸道激素，進(jìn)餐后在食物刺激下，由回腸和結(jié)腸粘膜層的L細(xì)胞分泌，能夠以葡萄糖依賴的方式刺激胰島素分泌，抑制胰高血糖素分泌來調(diào)控血糖，GLP-1的生物學(xué)作用通過與胰島β細(xì)胞的GLP-1受體(GLP-IR)結(jié)合產(chǎn)生。GLP-1受體廣泛分布于各種組織器官（胰腺、肺臟、心臟、血管平滑肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、腎臟、胃腸道、中樞

2、神經(jīng)系統(tǒng)、周圍神經(jīng)系統(tǒng)），GLP-1通過GLP-IR發(fā)揮作用。GLP-1是一種對許多組織具有抗氧化保護作用的腸道激素。內(nèi)源性GLP-1分泌后很快被二肽基肽酶-4(dipeptidyl peptidase DPP-Ⅳ)降解，在血液中的半衰期只有1-2 min。利拉魯肽是一種人GLP-1長效類似物，與天然GLP-1有97％的同源性，它在天然GLP-1的分子結(jié)構(gòu)上更換了一個氨基酸，并增加了一個16碳棕櫚酰側(cè)鏈。不僅保留天然GLP-1的功效，而

3、且由于存在脂肪酸側(cè)鏈，其分子不易被DPP-4降解，并能與白蛋白結(jié)合從而增加代謝穩(wěn)定性。利拉魯肽是GLP-1酰化類似物，可以在皮下注射部位吸收。2009年在歐洲和日本允許使用，2010年美國FDA批準(zhǔn)使用。利拉魯肽作為新的降糖藥物已廣泛應(yīng)用于臨床，越來越多的證據(jù)表明，利拉魯肽具有多種降糖外的作用，如保護血管內(nèi)皮細(xì)胞、減少糖尿病腎臟的炎癥因子的表達(dá)等。最新研究顯示，利拉魯肽可顯著減少糖尿病大鼠肝臟內(nèi)脂質(zhì)的含量，減輕糖尿病鼠肝臟脂肪變。FGF

4、-19、FGF-21是新的脂肪因子，分別主要由腸道和肝臟細(xì)胞分泌。研究證實這兩種因子對糖脂代謝，尤其是肝臟脂肪代謝起著極其重要的作用。本研究旨在探討利拉魯肽是否可通過影響FGF-19、FGF-21的水平，是否繼而通過激活A(yù)MPK能量代謝相關(guān)信號通路，調(diào)節(jié)肝臟脂肪代謝關(guān)鍵酶的表達(dá)，最終實現(xiàn)對糖尿病大鼠非酒精性脂肪肝病的保護作用。
　　方法:采用高糖高脂飲食聯(lián)合小劑量STZ建立糖尿病脂肪肝病動物模型，檢測利拉魯肽對糖尿病大鼠血糖、血脂

5、、胰島素抵抗的影響，應(yīng)用ELISA方法監(jiān)測血FGF-19、FGF-21的水平的變化;計算肝臟指數(shù)、HE和油紅染色觀察肝臟形態(tài)學(xué)變化和肝臟內(nèi)脂質(zhì)蓄積的情況;分析糖尿病大鼠血FGF-19、 FGF-21的水平與糖尿病大鼠血生化、肝臟指數(shù)、肝臟內(nèi)脂肪含量的相關(guān)性;采用Real-timePCR技術(shù)和Westernblot技術(shù)檢測利拉魯肽對肝臟FGF-19、FGF-21轉(zhuǎn)錄激活因子CREBH、PPAR-α的表達(dá)影響情況;進(jìn)而檢測利拉魯肽對AMPK

6、信號通路關(guān)鍵基因和脂代謝關(guān)鍵酶基因的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:1.利拉魯肽可顯著降低糖尿病大鼠血糖、血TG、TC水平和顯著改善大鼠體重、肝臟指數(shù)。
　　2.糖尿病組大鼠肝臟脂肪樣變明顯，利拉魯肽可顯著降低大鼠肝臟炎性活動指數(shù)和脂肪含量，減輕糖尿病大鼠非酒精性脂肪樣病變。
　　3.利拉魯肽可顯著升高血FGF-19、FGF-21的水平。
　　4.血FGF-19、FGF-21水平與糖尿病大鼠肝臟指數(shù)、肝臟內(nèi)脂肪蓄積成都成反

7、比。
　　5.糖尿病大鼠肝臟CREBH、PPAR-α的表達(dá)顯著降低，而利拉魯肽可明顯增加糖尿病大鼠肝臟CREBH、PPAR-α的表達(dá)。
　　6.利拉魯肽可促進(jìn)糖尿病大鼠肝臟FGFR的表達(dá)。其中利拉魯肽促進(jìn)FGFR1的表達(dá)增加量達(dá)57％、FGFR3增加49％，、FGFR4增加82％而對FGFR2的表達(dá)無明顯增加。
　　7.利拉魯肽可上調(diào)AMPKα1以及p-AMPK的表達(dá)，而對AMPKα2表達(dá)的影響無統(tǒng)計學(xué)差異。
　

8、　8.利拉魯肽可明顯促進(jìn)糖尿病大鼠肝臟脂肪酸β氧化關(guān)鍵酶CPT-1 mRNA的表達(dá)，顯著抑制脂肪合成關(guān)鍵酶FAS、 SREBP-1、 HMGR mRNA的表達(dá)。
　　9.利拉魯肽可顯著提高糖尿病患者血FGF19、FGF21的水平、改善糖尿病患者肝脾比值(L/S)。
　　結(jié)論:利拉魯肽可通過升高糖尿病大鼠血FGF-19、FGF-21水平，上調(diào)肝臟FGFR的表達(dá)水平，激活A(yù)MPK信號通路，調(diào)節(jié)糖尿病大鼠肝臟脂代謝關(guān)鍵酶的表達(dá)水平