柚皮素靶向let-7a-TGFBR1信號(hào)途徑延緩糖尿病腎損傷的研究.pdf

1、第一部分柚皮素延緩糖尿病腎病大鼠腎損傷的研究
　　目的：探討柚皮素對(duì)糖尿病腎病(Diabetic nephropathy，DN)大鼠腎臟保護(hù)作用。
　　方法：采用高糖高脂飲食聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素腹腔注射的方法建立 DN大鼠模型。將 DN模型大鼠隨機(jī)分為 DN組和柚皮素（Naringenin，NAR）組，按50 mg/kg劑量治療6周。檢測(cè)大鼠24h尿蛋白定量、肌酐清除率、腎臟指數(shù)；HE染色觀察腎組織形態(tài)學(xué)和檢測(cè)腎小球面積；R

2、eal time RT PCR法檢測(cè)Ⅳ型膠原（type4 collagen， Col4）和纖維連接蛋白（Fibronectin，F(xiàn)N）mRNA的表達(dá)；Western blot和免疫熒光檢測(cè)Col4和FN蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：成功建立了DN大鼠模型。DN組大鼠較正常組大鼠24h尿蛋白顯著升高，肌酐清除率明顯下降，腎臟指數(shù)明顯增大，腎小球呈肥大狀態(tài)，同時(shí)Col4和FN的mRNA水平和蛋白表達(dá)量均升高；經(jīng)柚皮素治療后的 DN大鼠的24

3、h尿蛋白明顯降低，肌酐清除率升高，腎臟指數(shù)降低，腎小球肥大減輕，同時(shí)腎臟組織中Col4和FN的mRNA水平和蛋白表達(dá)量明顯降低。
　　結(jié)論：柚皮素通過(guò)調(diào)控糖尿病腎病大鼠腎組織中細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的合成，減輕腎臟病理?yè)p害，從而起到保護(hù)腎臟的作用。
　　第二部分柚皮素對(duì)高糖條件下系膜細(xì)胞增殖的調(diào)控作用
　　目的：探討柚皮素對(duì)高糖培養(yǎng)的腎小球系膜細(xì)胞增殖的調(diào)控作用。
　　方法： MTT法檢測(cè)不同濃度、不同時(shí)間下柚皮素對(duì)系膜

4、細(xì)胞生長(zhǎng)的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)柚皮素對(duì)細(xì)胞周期的影響；Western blot和免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞外基質(zhì)相關(guān)蛋白Col4和FN表達(dá)水平。
　　結(jié)果：柚皮素抑制系膜細(xì)胞增殖的作用呈時(shí)間和劑量依賴(lài)性，并使系膜細(xì)胞生長(zhǎng)停滯于 G2期，同時(shí)柚皮素抑制系膜細(xì)胞合成細(xì)胞外基質(zhì)。
　　結(jié)論：柚皮素抑制腎小球系膜細(xì)胞增殖與合成細(xì)胞外基質(zhì)。
　　目的：探討柚皮素延緩糖尿病腎損傷的作用機(jī)制。
　　方法： Real time RT PC

5、R檢測(cè)microRNA let-7a在糖尿病腎病大鼠和小鼠腎小球系膜細(xì)胞中的表達(dá)；雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)和Western blot檢驗(yàn)TGFBR1是否為let-7a的靶基因；Western blot檢測(cè)柚皮素和let-7a分別作用以及共同作用對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)相關(guān)蛋白和 TGF-β1/smad信號(hào)途徑相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響。
　　結(jié)果： let-7a在糖尿病腎病大鼠血液和組織以及高糖培養(yǎng)的小鼠系膜細(xì)胞中呈低表達(dá)狀態(tài)，經(jīng)柚皮素作用后 let-

6、7a表達(dá)上調(diào)；驗(yàn)證了TGFBR1是 let-7a的一個(gè)靶基因；在組織和細(xì)胞中 TGF-β1、TGFBR1和磷酸化 smad2蛋白的表達(dá)量均升高，TGF-β1/smad信號(hào)途徑抑制因子smad7蛋白表達(dá)量降低，經(jīng)柚皮素治療后，TGF-β1、TGFBR1和磷酸化 smad2蛋白的表達(dá)量均降低，smad7蛋白表達(dá)量升高；同時(shí)，柚皮素通過(guò)上調(diào) let-7a抑制 TGFBR1和磷酸化 smad2的表達(dá)以及抑制Col4和FN蛋白合成。
　　結(jié)