ZIP5(SLC39A5)表達(dá)下調(diào)抑制食管癌移植瘤生長及其機制的研究.pdf

1、目的：從動物水平探討ZIP5(SLC39A5)表達(dá)下調(diào)對食管癌發(fā)生、發(fā)展的作用及其作用機制。
　　方法：
　　1.利用RT-PCR方法驗證ZIP5mRNA在KYSE170K和KYSE170S兩種細(xì)胞株中的表達(dá)水平；
　　2.收集對數(shù)期的兩種細(xì)胞，分別接種至兩組裸鼠右肩胛部皮下（5×106細(xì)胞/只）；動態(tài)觀察裸鼠移植瘤的體積變化，比較ZIP5表達(dá)下調(diào)對食管癌移植瘤生長的影響。
　　3.利用流式細(xì)胞術(shù)方法檢測ZIP5

2、表達(dá)下調(diào)對裸鼠移植瘤組織中細(xì)胞G0/G1期百分比和凋亡率的影響。
　　4.利用qRT-PCR方法從mRNA水平檢測ZIP5表達(dá)下調(diào)對COX-2， cyclin D1和E-cadherin基因表達(dá)的影響；采用免疫組織化學(xué)和Western-blot方法從蛋白水平檢測ZIP5表達(dá)下調(diào)對COX-2，cyclin D1和E-cadherin蛋白表達(dá)的影響。
　　5.利用電感耦合等離子體質(zhì)譜法檢測裸鼠外周血和移植瘤組織中的鋅水平。

3、>　　結(jié)果：1 RT-PCR結(jié)果顯示ZIP5 mRNA和蛋白在KYSE170K細(xì)胞株中的相對表達(dá)量分別降低了79.01％和77.84%，認(rèn)為ZIP5在KYSE170K細(xì)胞株中低表達(dá)；2食管癌移植瘤體積變化曲線顯示，處死裸鼠時實驗組（接種KYSE170K）、對照組（接種KYSE170S）移植瘤體積分別為（614.50±87.12）mm3、（1095.43±266.64）mm3，實驗組移植瘤體積小于對照組（P=0.012）；實驗組、對照組瘤

4、體的重量分別為（0.44±0.11）g，（0.70±0.08）g，實驗組移植瘤的重量低于對照組（P=0.007）；3流式細(xì)胞術(shù)檢測移植瘤細(xì)胞G0/G1期百分比和凋亡率的結(jié)果顯示，實驗組G0/G1期百分比（48.94%±4.46%）與對照組（46.3%±2.78%）相比，兩組間無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）；實驗組細(xì)胞凋亡率（32.50%±5.24%）與對照組（37.16%±4.40%）相比，兩組間無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）；4 qRT-

5、PCR方法檢測移植瘤中ZIP5、COX-2、cyclin D1、E-cadherin、Bcl-2、VEGF和MMP9 mRNA水平顯示，ZIP5 mRNA在實驗組移植瘤中的相對表達(dá)（0.46±0.33）低于對照組（1.06±0.43），COX-2 mRNA在實驗組移植瘤中的相對表達(dá)量（0.64±0.12）低于對照組（1.03±0.25），E-cadherin mRNA在實驗組移植瘤中的相對表達(dá)量（1.68±0.31）高于對照組（1.00

6、±0.09）（P<0.05），而cyclin D1、Bcl-2、VEGF和MMP9 mRNA在在兩組移植瘤中的相對表達(dá)量均無差異。免疫組化檢測移植瘤中ZIP5、COX-2、E-cadherin蛋白的計分結(jié)果顯示，ZIP5蛋白在實驗組移植瘤組織中的得分（2.55±0.34）低于對照組（5.15±1.74），COX-2蛋白在實驗組移植瘤組織中的得分（1.43±0.69）低于對照組（3.23±1.29），而E-cadherin蛋白在實驗組移植

7、瘤組織中的得分（10.6±1.33）高于對照組（6.70±1.64）；Western-blot檢測移植瘤中ZIP5、COX-2、E-cadherin蛋白的結(jié)果顯示，ZIP5蛋白在實驗組移植瘤中的相對表達(dá)量（0.38±0.02）低于對照組（0.81±0.13），COX-2蛋白在實驗組移植瘤中的相對表達(dá)量（0.13±0.06）低于對照組（0.33±0.11），E-cadherin蛋白在實驗組移植瘤中的相對表達(dá)量（0.85±0.05）高于對照

8、組（0.45±0.04）（P<0.05）；5電感耦合等離子體質(zhì)譜法測量鋅含量的結(jié)果顯示，外周血中鋅在實驗組和對照組中的含量分別為（2.47±0.27）mg/kg、（2.48±0.28）mg/kg，兩組間無統(tǒng)計學(xué)差異，移植瘤組織中鋅在實驗組和對照組的含量（20.30±3.28） mg/kg、（19.60±3.85）mg/kg，兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.ZIP5表達(dá)下調(diào)能夠抑制裸鼠移植瘤的生長