丙型肝炎病毒受體OCLN胞外環(huán)重構表達及功能的研究.pdf

1、丙型肝炎病毒是黃病毒科丙型肝炎病毒屬的重要人類病原體，其慢性感染通常會導致肝纖維化，肝硬化，肝癌等嚴重肝病。由于HCV具有多種基因型，基因型高度變異，且缺乏有效的小動物模型等，針對于HCV病毒的疫苗研究目前沒有實質性突破。雖然現在作用于HCV的直接抗病毒藥物(DAAs)具有較好的持續(xù)病毒應答率(SVR)，但是該治療方法仍有病毒易耐受，治療周期長，靶點范圍相對較窄以及治療費用昂貴等問題。DAAs藥物主要作用于HCV復制階段，HCV受體則在

2、病毒入侵過程中起關鍵作用。鑒于此，HCV受體類似物可作為一種新型的HCV入侵的抑制劑，在HCV的治療中起到協(xié)同作用。
　　OCLN是HCV入侵過程中的重要受體之一，具有種屬特異性。本研究以OCLN的胞外環(huán)為主要研究對象，以HIVgp41蛋白N34和C36多肽在融合構象的六螺旋束構象為模型，構建一個六螺旋束的骨架蛋白(6HV1)。在此基礎上，將OCLN的ECL1和ECL2兩個胞外環(huán)進行不同組合后裝配到該六螺旋束骨架蛋白上，這些OCL

3、N胞外環(huán)的重構蛋白成功克隆并進行體外表達和純化。利用HCV細胞源病毒系統(tǒng)，我們篩選出雙環(huán)構建蛋白D1ECL1S+D2ECL2在沒有細胞毒性條件下抑制HCV入侵效果最好。圓二色譜實驗發(fā)現，D1ECL1S+D2ECL2的構建，因OCLN胞外環(huán)的插入，改變了重構蛋白二級結構中的α螺旋占比;熱變性實驗發(fā)現該蛋白結構比較穩(wěn)定，解螺旋溫度約為89.09℃。時間節(jié)點(time of addition)實驗證明D1ECL1S+D2ECLS主要是在HCV

4、入侵的早期發(fā)揮作用，且主要作用于HCV病毒與宿主細胞的結合階段。通過蛋白作用靶點的研究，我們發(fā)現D1ECL1S+D2ECL2主要是與HCV病毒粒子相互結合，從而抑制HCV的入侵，這與我們的實驗構想相一致。同時我們發(fā)現，D1ECL1S+D2ECL2對HCV多種基因型的HCV假病毒的感染具有較好的抑制效果。
　　綜上所述，本研究發(fā)現了一種潛在的針對HCV入侵的廣譜抑制劑，對DAAs藥物的治療可能起到協(xié)同作用。且通過一種新型構建，得到了