2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是引起慢性肝炎的主要病原體,約80%HCV感染者發(fā)展為慢性肝炎,并與肝硬化和肝細(xì)胞肝癌的發(fā)生密切相關(guān),已成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。然而,迄今尚缺乏有效的治療措施,疫苗的研制也步履維艱。樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cell,DC)作為誘導(dǎo)固有免疫(innate immune)和適應(yīng)性免疫(adaptive immune)應(yīng)答的核心環(huán)節(jié),在機(jī)體抗病毒免疫應(yīng)答中發(fā)揮著重要作用,由DC

2、分泌的胞外體(dendritic cell exosome,DC-Ex)富集MHCI/II類分子、協(xié)同刺激分子、熱休克蛋白70等多種生物活性分子于一身,作為細(xì)胞功能的使者,以“特洛伊木馬”的形式將免疫活化信息傳遞給其他免疫細(xì)胞,發(fā)揮特異性免疫效應(yīng)。因此,選擇性地為Ex載荷HCV抗原信息,理論上可以大大提高抗原的免疫原性,從而有效地誘導(dǎo)抗原特異性細(xì)胞免疫及體液免疫應(yīng)答,并建立抗病毒記憶反應(yīng),這為制備HCV疫苗提供了一個(gè)新的研究策略?;谏?/p>

3、述學(xué)術(shù)假設(shè),結(jié)合近年有關(guān)HCV研究所獲得的信息,本研究對(duì)DC-Ex的功能特性進(jìn)行以下兩方面的探討:
  1、DC-Ex制備方法的初步建立及分析鑒定
 ?、貲C-Ex制備方法的初步建立選用永生化的小鼠樹(shù)突狀細(xì)胞株DC2.4為研究對(duì)象,在尿酸(uric acid,UA)濃度為0.05mmol/L,0.1mmol/L,0.2mmol/L和0.3mmol/L培養(yǎng)24h條件下,收集細(xì)胞培養(yǎng)上清,捕獲ELISA法檢測(cè)Ex表面特異性標(biāo)志C

4、D80、CD86的表達(dá)率,間接考量Ex產(chǎn)生的動(dòng)力學(xué)水平,探索UA對(duì)DC分泌Ex的影響,為制備大量的較高純度的Ex做準(zhǔn)備;基于Ex的大小和密度,本研究對(duì)Ex傳統(tǒng)分離方法進(jìn)行改進(jìn),把超濾技術(shù)引入Ex的制備過(guò)程,即應(yīng)用中空纖維器去除細(xì)胞及細(xì)胞碎片、Amicon Ultra超濾離心管壓縮體積、密度梯度超離心純化獲得DC-Ex提取物。對(duì)照組則采用傳統(tǒng)的分級(jí)分離的制備方法,比較兩種方法的優(yōu)劣。
  ②DC-Ex的分析鑒定應(yīng)用透射電鏡對(duì)DC-E

5、x提取物進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定,十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulphte-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和Western blot進(jìn)行蛋白組成分析。
  2、HCV特異性DC-Ex誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答反應(yīng)
  選用HCV核心蛋白C,體外刺激DC2.4細(xì)胞株,獲得具有HCV特異性的DC-Ex;把制備的C57BL/6小鼠脾細(xì)胞懸液與HCV特異性的

6、DC-Ex共孵育。收集培養(yǎng)上清,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immune assay,ELISA)檢測(cè)各組培養(yǎng)上清中IL-6、IL-12及IFN-γ的水平,探討DC-Ex的呈遞免疫活化信息、誘導(dǎo)抗原特異性免疫反應(yīng)的能力。
  實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
  1、尿酸是DC分泌Ex的重要調(diào)節(jié)因素,以劑量依賴方式影響Ex的產(chǎn)量,濃度為0.1mmol/L時(shí),Ex的產(chǎn)量最高。
  2、所建立的超濾離心法是一種簡(jiǎn)便高效的制備E

7、x的實(shí)驗(yàn)方法,獲得的DC-Ex在電鏡下呈典型的杯狀,由脂質(zhì)雙層膜包繞的扁平半球體,直徑約60-90nm,SDS-PAGE帶型和文獻(xiàn)報(bào)道相似,包含有主要的特征性標(biāo)志物分子MHCI,MHCII,CD80和CD86,與傳統(tǒng)分離法相比,超濾離心法耗時(shí)少,產(chǎn)量和純度較高。
  3、HCV特異性DC-Ex可有效地將免疫活化信息呈遞給脾細(xì)胞,誘導(dǎo)脾細(xì)胞產(chǎn)生較高水平的IL-6、IL-12、IFN-γ。
  初步實(shí)驗(yàn)結(jié)論:
  在尿酸的

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