體外負(fù)載乙型肝炎病毒抗原的人樹(shù)突狀細(xì)胞免疫特性研究.pdf

1、該文通過(guò)分離人外周血,用貼壁法獲取單核細(xì)胞,體外聯(lián)合應(yīng)用GM-CSF、IL-4、TNF-α、IFN-α,培養(yǎng)誘導(dǎo)成熟DC.再選擇適合的HBV抗原濃度,予以兩次抗原沖擊,使其成為負(fù)載乙肝抗原(HBsAg或HBcAg)的DC.再將抗原負(fù)載DC和自體T淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng),用四色法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)胞內(nèi)因子,觀測(cè)DC對(duì)T淋巴細(xì)胞的活化.實(shí)驗(yàn)結(jié)果:一.人外周血單核細(xì)胞經(jīng)GM-CSF、IL-4、TNF-α、IFN-α聯(lián)合培養(yǎng)誘導(dǎo),第7天收獲成熟DC.其細(xì)

2、胞形態(tài)典型,混雜細(xì)胞少.FCM檢測(cè)示DC表面分子分別為CD1a 55.53％、CD80 83.78%、DR98.76%、CD86 99.08%、CD83 64.70%、CD40 76.23%.AMLR結(jié)果顯示,培養(yǎng)DC具很強(qiáng)的T細(xì)胞增殖效應(yīng).二.抗原沖擊構(gòu)成抗原負(fù)載DC用HBsAg或HBcAg抗原肽沖擊培養(yǎng)DC,第7天收獲DC后,經(jīng)免疫組化檢測(cè)HBV抗原(HBsAg和HBcAg),結(jié)果呈陽(yáng)性.FCM檢測(cè)DC表面分子無(wú)明顯變化,并且MLR

3、反應(yīng)提高.三、經(jīng)絲裂霉素C處理的DC與自體維持淋巴細(xì)胞1:10混合培養(yǎng),5天后采用四色法測(cè)T淋巴細(xì)胞胞內(nèi)因子,IFN-γ和IL-4,評(píng)估抗原負(fù)載DC對(duì)T淋巴細(xì)胞的活化效應(yīng).結(jié)果顯示,在體外慢乙肝病人HBsAg負(fù)載DC和HBcAg負(fù)載DC的誘導(dǎo)都以激活Th1和Tc1細(xì)胞為主.HBsAb陽(yáng)性的健康人DC負(fù)載HBsAg后還能產(chǎn)生明顯增強(qiáng)的Th1和Tc1細(xì)胞因子.雖然慢性乙型肝炎病人的培養(yǎng)DC較正常人表面分子表達(dá)明顯降低,抗原遞呈功能缺陷.但其