慢性乙型肝炎合并肝癌患者樹突狀細(xì)胞負(fù)載HBV抗原的研究.pdf

1、目的：研究慢性乙型肝炎合并肝細(xì)胞癌患者髓樣樹突狀細(xì)胞負(fù)載HBV抗原后表型和功能的變化。 方法：成分血分離機(jī)采集31例慢性乙肝合并肝細(xì)胞癌患者的外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)，體外在GM-CSF和IL-4的作用下誘導(dǎo)mDC分化、發(fā)育，加入“細(xì)胞因子雞尾酒”(IL-1β、IL-6、TNF-α和PGE2)促進(jìn)mDC成熟，并在加入促成熟因子前分別用HBcAg和HBsAg致敏mDC，LPS作為對(duì)照抗原，檢測(cè)抗原致敏對(duì)mDC表型和功能的影響。

2、 結(jié)果：在慢性乙肝合并肝細(xì)胞癌患者中：1.mDC表面分子表達(dá)：不成熟mDC表面分子CD80、CD83表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞百分率明顯低于成熟mDC(CD80：9.3％±3.3％vs34.0％±20.7％，CD83：4.5％±2.7％vs13.2％±6.5％，均P＜0.05)；經(jīng)HBcAg致敏的mDC表面分子CD80、CD86、CD40、HLA-DR表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞百分率較無(wú)抗原致敏時(shí)明顯增加(CD80：58.3％±21.1％vs34.0％

3、±20.7％，CD86：79.8％±12.9％vs45.2％±22.0％，CD40：69.8％±12.8％vs54.2％±23.2％，HLA-DR：78.4％±11.7％vs54.6％±20.7％，均P＜0.05);經(jīng)HBsAg致敏的mDC表面分子CD86、HLA-DR表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞百分率較無(wú)抗原致敏時(shí)明顯增加(CD86：70.2％±9.1％vs45.2％±22.0％，HLA-DR：72.3％±3.9％vs54.6％±20.7％，均P＜

4、0.05)；經(jīng)LPS致敏的mDC表面分子CD80、CD86、CD40、CD83、HLA-DR表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞百分率較無(wú)抗原致敏時(shí)明顯增加(CD80：57.0％±7.1％vs34.0％±20.7％，CD86：96.5％±2.1％vs45.2％±22.0％，CD40：79.5％±24.8％vs54.2％±23.2％，CD83：46.5％±0.7％vs13.26％±6.52％，HLA-DR：97.5％±2.1％vs54.6％±20.7％，均P＜

5、0.05)。2.mDC分泌的細(xì)胞因子：經(jīng)HBcAg致敏的mDC分泌細(xì)胞因子IL-10和IL-12的量明顯高于無(wú)抗原致敏組(IL-10：49.4±33.6pg/mlvs18.6±5.5pg/ml，IL-12：658.1±306.7pg/mlvs122.4±87.1pg/ml，均P＜0.05)；經(jīng)HBsAg致敏的mDC分泌IL-12的量高于無(wú)抗原致敏組(312.1±209.2pg/mlvs122.4±87.1pg/ml，P＜0.05)，而I

6、L-10在兩組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;經(jīng)LPS致敏的mDC分泌IL-10和IL-12的量明顯高于無(wú)抗原致敏組(IL-10：40.7±1.1pg/mlvs18.6±5.5pg/ml，IL-12：908.0±6.3pg/mlvs122.4±87.1pg/ml，均P＜0.05)。3.mDC刺激自體T淋巴細(xì)胞增殖：HBcAg和HBsAg致敏的mDC刺激自體T淋巴細(xì)胞增殖的效果均高于無(wú)抗原致敏組(P＜0.05)，在LPS致敏組也發(fā)現(xiàn)了同樣結(jié)果(P＜0

7、.05)。4.mDC介導(dǎo)自體T淋巴細(xì)胞分泌IFN-γ：HBcAg致敏的mDC介導(dǎo)自體T細(xì)胞分泌的IFN-γ的頻數(shù)明顯高于無(wú)抗原致敏組(43.5±32.8SFC/105T細(xì)胞vs13.3±9.1SFC/105T細(xì)胞，P＜0.05);HBsAg致敏的mDC介導(dǎo)自體T細(xì)胞分泌IFN-γ的頻數(shù)明顯高于無(wú)抗原致敏組(23.2±12.9SFC/105T細(xì)胞vs13.3±9.1SFC/105T細(xì)胞，P＜0.05)；LPS致敏的mDC介導(dǎo)自體T細(xì)胞分泌

8、IFN-γ的頻數(shù)明顯高于無(wú)抗原致敏組(61.9±55.3SFC/105T細(xì)胞vs13.3±9.1SFC/105T細(xì)胞，P＜0.05)。5.mDC介導(dǎo)自體抗原特異性CD8+T細(xì)胞的產(chǎn)生：HBcAg致敏的mDC誘導(dǎo)抗原肽段(HBcAg18-27)特異性CD8+T細(xì)胞產(chǎn)生的百分比高于無(wú)抗原致敏組(0.06％±0.01％vs0.0％±0.0％，P＜0.05);HBsAg致敏的mDC誘導(dǎo)抗原肽段(HBsAg183-191)特異性CD8+T細(xì)胞產(chǎn)生

9、的百分比高于無(wú)抗原致敏組(0.03％±0.01％vs0.0％±0.0％，P＜0.05)；LPS致敏的mDC對(duì)于誘導(dǎo)HBV抗原肽段特異性CD8+T細(xì)胞的產(chǎn)生并無(wú)顯著作用(HBcAg18-27：0.02％±0.01％vs0.0％±0.0％，HBsAg183-191：0.0％±0.0％vs0.0％±0.0％，P＞0.05)。 結(jié)論：體外經(jīng)HBV抗原致敏mDC可以提高其表面共刺激分子和MHC分子表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞百分率，提高mDC分泌細(xì)胞因