發(fā)夾狀核酶基因治療乙型肝炎病毒的體外實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:研究針對HBV C區(qū)的G<,11>位飽和突變的發(fā)夾狀核酶的體外制備與活性比較.方法:用計算機設(shè)計針對HBV C區(qū)的發(fā)夾狀核酶基因,并把合成的G<,11>位飽和突變的發(fā)夾狀核酶基因片段克隆入自剪核酶載體p1.5的3'-cis-Rz或5'-cis-Rz之間.四種發(fā)夾狀核酶通過重組質(zhì)粒的體外轉(zhuǎn)錄獲得.用<'32>P標記含有HBV C區(qū)的pKC的體外轉(zhuǎn)錄物作為靶RNA,變性PAGE純化.把未標記的各種核酶與同位素標記的靶RNA在不同條件下

2、進行切割反應(yīng),進行PAGE放射自顯影后分析反應(yīng)結(jié)果.構(gòu)建發(fā)夾狀核酶和HBV的真核表達載體,共轉(zhuǎn)染肝癌細胞株,通過Southern Blot分析核酶胞內(nèi)抑制HBV復(fù)制的作用.結(jié)論:該試驗制備的發(fā)夾狀核酶HpRz<,C>具有特異的催化切割活性;它有望在不遠的未來可發(fā)展成為治療乙型肝炎的核酸藥物.從G<,11>位突變的發(fā)夾狀核酶的切割活性的比較中證實,G<,11>位點對于發(fā)夾狀核酶的活性不是必需的,所以與此相對應(yīng)的RNA位點選擇不受此位點的限

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