KRT8對(duì)乙型肝炎病毒復(fù)制影響的體外研究.pdf

1、目的：研究宿主蛋白KRT8對(duì)乙型肝炎病毒(HBV)復(fù)制的影響。
　　方法：體外培養(yǎng)穩(wěn)定表達(dá)HBV的肝癌細(xì)胞株(HepG2.2.15細(xì)胞)。(1)利用抑制KRT8基因表達(dá)的三段特異的siRNA片段轉(zhuǎn)染HepG2.2.15細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)分siRNA-1組、siRNA-2組、siRNA-3組、陰性對(duì)照組、脂質(zhì)體對(duì)照組和空白對(duì)照組，轉(zhuǎn)染48小時(shí)后收集細(xì)胞和上清液以檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)KRT8基因表達(dá)水平和上清液中HBV DNA表達(dá)水平。(2)利用高表達(dá)

2、KRT8基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2.2.15細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)分質(zhì)粒組和對(duì)照組，轉(zhuǎn)染48小時(shí)后收集細(xì)胞和上清液以檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)KRT8基因表達(dá)水平和上清液中HBV DNA表達(dá)水平。(3)利用拉米夫定藥物與HepG2.2.15細(xì)胞共培養(yǎng)以抑制細(xì)胞HBV復(fù)制，實(shí)驗(yàn)分拉米夫定組和對(duì)照組，共培養(yǎng)72小時(shí)后收集上清液和細(xì)胞以檢測(cè)上清中HBVDNA表達(dá)水平和細(xì)胞內(nèi)KRT8基因表達(dá)水平。RT-PCR法檢測(cè)KRT8mRNA水平，熒光定量PCR法檢測(cè)HBV DNA水平

3、。
　　結(jié)果：(1)轉(zhuǎn)染干擾KRT8基因的siRNA后，siRNA-1組、siRNA-2組、siRNA-3組細(xì)胞內(nèi)KRT8 mRNA表達(dá)水平均顯著下調(diào)(RQ<0.5)，mRNA表達(dá)抑制率分別為90％、89％和80％(p<0.01)，同時(shí)，上清液中HBV DNA表達(dá)水平也顯著下降，下降率分別為36％、34％、38％(p<0.05)。(2)轉(zhuǎn)染高表達(dá)KRT8基因的質(zhì)粒后，質(zhì)粒組KRT8 mRNA表達(dá)水平顯著上調(diào)(RQ>2)，質(zhì)粒組KR

4、T8 mRNA水平是對(duì)照組的40.32倍(p<0.01)，同時(shí)，上清液中HBV DNA表達(dá)水平也顯著增加，是對(duì)照組的28倍(p<0.01)。(3)拉米夫定藥物與細(xì)胞共培養(yǎng)后，拉米夫定組HBV DNA表達(dá)水平與對(duì)照組相比明顯下降，下降率為66％(p<0.01)，但拉米夫定組KRT8 mRNA表達(dá)無(wú)顯著改變(RQ=0.758±0.414)，與對(duì)照組相比，雖下降了24％，但差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。
　　結(jié)論：抑制宿主KRT