乙型肝炎病毒C蛋白對(duì)NK細(xì)胞功能影響的研究.pdf

1、目的:
　　觀察HBV C蛋白在NK細(xì)胞中的表達(dá)及其對(duì)NK細(xì)胞功能的影響,從而為乙型肝炎發(fā)病機(jī)制及防治的研究提供新的思路。
　　方法:
　　構(gòu)建HBV C基因真核表達(dá)載體pHBI-CMV-HBC,經(jīng)雙酶切及測(cè)序鑒定證實(shí)該重組真核表達(dá)質(zhì)粒含有所需目的基因。然后,通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將其轉(zhuǎn)入NK-92細(xì)胞;48h后,通過(guò)Western blotting檢測(cè)HBV C基因在NK-92細(xì)胞中HBV C蛋白的表達(dá)情況;然后通過(guò)MTT

2、比色法檢測(cè)NK-92細(xì)胞對(duì)HepG2細(xì)胞的細(xì)胞毒作用,用ELISA法檢測(cè)NK-92細(xì)胞分泌的IFN-γ水平。
　　結(jié)果:
　　經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定證實(shí),所構(gòu)建pHBI-CMV-HBC載體結(jié)構(gòu)正確,目的片斷與GeneBank中 HBV C基因完全符合,沒(méi)有發(fā)生突變。Western blotting結(jié)果表明,pHBI-CMV-HBC轉(zhuǎn)染NK-92細(xì)胞后,可在NK-92細(xì)胞中表達(dá)大小約為21KDa的C蛋白,并且可以和特異性抗HBc單克

3、隆抗體結(jié)合。MTT比色法結(jié)果顯示與兩個(gè)對(duì)照組相比,轉(zhuǎn)染了pHBI-CMV-HBC的NK-92細(xì)胞對(duì)于HepG2細(xì)胞的細(xì)胞毒活性有所提高,差異具有顯著性(P<0.01)。ELISA實(shí)驗(yàn)表明,轉(zhuǎn)染了pHBI-CMV-HBC的NK-92細(xì)胞分泌 IFN-γ的水平也較上述兩對(duì)照組提高,差異具有顯著性(P<0.01)。
　　結(jié)論:
　　1、pHBI-CMV-HBC載體可以通過(guò)脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染到NK細(xì)胞中,并且在其中成功表達(dá)。
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