胃癌中LGR5與Treg細胞的預后意義及其作用機制探索.pdf

1、[目的]
　　多富含亮氨酸重復單位的G蛋白偶聯(lián)受體5(leucine rich repeat containing Gprotein coupled receptor5，LGR5)是近年來腫瘤干細胞標記物研究的熱點。調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)可分泌多種可溶性因子來調(diào)節(jié)免疫微環(huán)境，在腫瘤免疫逃避中起重要作用。本實驗的目的是研究胃癌組織中LGR5的表達和Treg細胞之間的聯(lián)系，并研究TGF-β蛋白對胃癌細胞中LGR5表達的調(diào)節(jié)作用及其潛

2、在機制。
　　[方法]
　　本研究采用2009年2月至2010年3月在我院確診的100例胃癌病人石蠟標本及2013年5月至2014年5月在我院確診的69例胃癌病人石蠟標本及新鮮組織標本。通過免疫組化觀察胃癌組織中LGR5的表達及Treg細胞的數(shù)量，并分析與預后的關(guān)系。運用流式微珠陣列(cytometric bead array, CBA)檢測胃癌組織中Th1/Th2相關(guān)細胞因子IL-2， IL-4，IL-6，IL-10，TN

3、F以及IFN-γ的表達;運用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測胃癌組織中TGF-β的表達。通過在胃癌細胞培養(yǎng)基中加入TGF-β蛋白和TGF-β/ALK5/Smad2信號通路抑制劑SB431542，觀察胃癌細胞中LGR5及β-catenin的表達變化。
　　[結(jié)果]
　　免疫組化結(jié)果顯示，LGR5高表達組患者生存時間較LGR5低表達組明顯縮短（五年總生存率:53％ vs.79％; P=0.0057）;同時，高Treg細胞數(shù)組患

4、者生存較低Treg細胞數(shù)組明顯縮短（五年總生存率:54％vs.76％; P=0.0167）。LGR5高表達組胃癌組織中Treg細胞數(shù)（X±SD:12.94±0.8673）相比于LGR5低表達組（(X)±SD:7.051±0.5915）明顯增高，兩者有統(tǒng)計學差異(P＜0.0001)。LGR5高低表達兩組間Th1/Th2相關(guān)細胞因子IL-2， IL-4，IL-6， IL-10，TNF以及IFN-γ表達并無明顯差異，而TGF-β1在LGR5高

5、表達組胃癌組織中的表達量明顯高于LGR5低表達組(P＜0.0001)。在胃癌細胞培養(yǎng)過程中，加入外源性TGF-β1蛋白后，LGR5的表達上調(diào)，同時，β-catenin的表達也隨之上調(diào)，而加入TGF-β/ALK5/Smad2信號通路的特異性拮抗劑SB431542之后，這種上調(diào)效應減弱。
　　[結(jié)論]
　　胃癌組織中表達的LGR5強度可視為一個潛在的預后指標，并有望成為下一個胃癌治療的生物靶點，且與Treg細胞呈一定相關(guān)性，后者