FOXN1，一個(gè)新的胃腸腫瘤抑癌基因.pdf

1、胃腸道腫瘤是危害人類健康最常見的惡性腫瘤，據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)顯示我國(guó)胃腸腫瘤的發(fā)病率、死亡率一直位于惡性腫瘤前五位，且皆有繼續(xù)升高的趨勢(shì)。腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多基因參與、多階段、多步驟的復(fù)雜的生物學(xué)過(guò)程，其中基因的改變:例如原癌基因的激活及抑癌基因的沉默則被認(rèn)為是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制。
　　目的:我們發(fā)現(xiàn)了Forkhead Box超家族中的FOXN1可能是一個(gè)新的腫瘤抑癌基因，該基因在胃腸正常組織中高表達(dá)，而在胃腸道腫瘤組織及多數(shù)腫

2、瘤細(xì)胞株中低表達(dá)，因此我們希望通過(guò)相關(guān)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證該基因的功能并闡明其在胃腸道腫瘤發(fā)生發(fā)展中起作用的可能機(jī)制。
　　方法:通過(guò)半定量RT-PCR和免疫組化檢測(cè)胃腸正常組織和腫瘤組織中FOXN1的表達(dá)水平;通過(guò)體外脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染，獲得穩(wěn)定表達(dá)FOXN1的胃癌和大腸癌細(xì)胞株，觀察體外FOXN1對(duì)細(xì)胞表型的影響，包括細(xì)胞的增殖能力、遷移能力、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞自噬等;通過(guò)建立裸鼠皮下種植模型進(jìn)一步觀察體內(nèi)FOXN1對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的影響;通過(guò)W

3、estern Blot檢測(cè)相關(guān)通路蛋白的表達(dá)，研究FOXN1可能的調(diào)控機(jī)制;并通過(guò)實(shí)時(shí)定量QPCR驗(yàn)證胃腸癌不同細(xì)胞株中microRNA的表達(dá)，找出FOXN1可能的上游表達(dá)調(diào)控機(jī)制。
　　結(jié)果:FOXN1在正常胃腸組織中高表達(dá)，而在大多數(shù)胃腸腫瘤組織和腫瘤細(xì)胞株中表達(dá)降低或沉默。FOXN1蛋白的表達(dá)與結(jié)直腸癌的低分期(P=0.003)、較少的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.003)、較少的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(P=0.014)及總生存期(P=0.011)

4、顯著相關(guān);與胃癌的低浸潤(rùn)(P=0.01)、低分期(P=0.042)及總生存期(P=0.044)顯著相關(guān)。細(xì)胞株轉(zhuǎn)染FOXN1后，通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)FOXN1能抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、遷移、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡、調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的自噬狀態(tài)。Western Blot和流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果提示FOXN1通過(guò)PI3K/AKT/mTOR通路調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞自噬，并與細(xì)胞凋亡協(xié)同促進(jìn)腫瘤細(xì)胞死亡。另外初步探索發(fā)現(xiàn)FOXN1可能是hsa-miR-192-5p的靶基因，但