FOXN1，一個新的胃腸腫瘤抑癌基因.pdf

1、胃腸道腫瘤是危害人類健康最常見的惡性腫瘤，據(jù)WHO統(tǒng)計顯示我國胃腸腫瘤的發(fā)病率、死亡率一直位于惡性腫瘤前五位，且皆有繼續(xù)升高的趨勢。腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是一個多基因參與、多階段、多步驟的復雜的生物學過程，其中基因的改變:例如原癌基因的激活及抑癌基因的沉默則被認為是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要機制。
　　目的:我們發(fā)現(xiàn)了Forkhead Box超家族中的FOXN1可能是一個新的腫瘤抑癌基因，該基因在胃腸正常組織中高表達，而在胃腸道腫瘤組織及多數(shù)腫

2、瘤細胞株中低表達，因此我們希望通過相關實驗進一步驗證該基因的功能并闡明其在胃腸道腫瘤發(fā)生發(fā)展中起作用的可能機制。
　　方法:通過半定量RT-PCR和免疫組化檢測胃腸正常組織和腫瘤組織中FOXN1的表達水平;通過體外脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染，獲得穩(wěn)定表達FOXN1的胃癌和大腸癌細胞株，觀察體外FOXN1對細胞表型的影響，包括細胞的增殖能力、遷移能力、細胞凋亡及細胞自噬等;通過建立裸鼠皮下種植模型進一步觀察體內(nèi)FOXN1對腫瘤細胞生長的影響;通過W

3、estern Blot檢測相關通路蛋白的表達，研究FOXN1可能的調(diào)控機制;并通過實時定量QPCR驗證胃腸癌不同細胞株中microRNA的表達，找出FOXN1可能的上游表達調(diào)控機制。
　　結果:FOXN1在正常胃腸組織中高表達，而在大多數(shù)胃腸腫瘤組織和腫瘤細胞株中表達降低或沉默。FOXN1蛋白的表達與結直腸癌的低分期(P=0.003)、較少的淋巴結轉(zhuǎn)移(P=0.003)、較少的遠處轉(zhuǎn)移(P=0.014)及總生存期(P=0.011)

4、顯著相關;與胃癌的低浸潤(P=0.01)、低分期(P=0.042)及總生存期(P=0.044)顯著相關。細胞株轉(zhuǎn)染FOXN1后，通過體內(nèi)外實驗發(fā)現(xiàn)FOXN1能抑制腫瘤細胞的生長、遷移、促進腫瘤細胞的凋亡、調(diào)節(jié)腫瘤細胞的自噬狀態(tài)。Western Blot和流式細胞術結果提示FOXN1通過PI3K/AKT/mTOR通路調(diào)節(jié)腫瘤細胞自噬，并與細胞凋亡協(xié)同促進腫瘤細胞死亡。另外初步探索發(fā)現(xiàn)FOXN1可能是hsa-miR-192-5p的靶基因，但