MEN2A家系RET原癌基因的一個新突變及其遺傳特征分析.pdf

1、多發(fā)性內分泌腺瘤綜合征(Multiple endocrine neoplasia syndrome，MEN)是指在同一患者先后或同時發(fā)生兩種或以上的內分泌腺腫瘤(或增生)。根據(jù)病因及腫瘤的組合不同，MEN綜合征又分為MEN-1型和MEN-2型。多發(fā)性內分泌腺瘤2型(MEN-2)的主要特征是：甲狀腺C細胞增生或甲狀腺髓樣癌(Medullary thyroidcarcinoma,MTC)、雙側腎上腺嗜鉻細胞瘤和甲狀旁腺增生或腺瘤。按其表型可

2、以分為三種亞型-MEN2A、 MEN2B、家族性甲狀腺髓樣癌(Familial medullarythyroid carcinoma,FMTC)及兩種變異型：先天性巨結腸癥(HirSchspmng病、HSCR)和苔蘚樣皮膚淀粉樣沉著癥。在MEN2A患者中，約95％有甲狀腺髓樣癌，50％伴有嗜鉻細胞瘤，20％伴有甲狀旁腺增生或腺瘤。 MEN2A是一種常染色體顯性遺傳性疾病，其外顯率幾乎高達100％。MEN2A的發(fā)病與RET原癌基因

3、突變所致的遺傳缺陷有關，不同的突變位點導致了MEN2A的表現(xiàn)型與疾病嚴重度的不同。自1993年國外首例報道MEN2A患者的RET基因學突變以來，共有超過100個位點突變的報告，MEN2A的突變主要集中在其中8個位點上。國內對MEN2A的研究多為病例報道，分子遺傳學的研究尚不多見。 目的：是通過對1個臨床擬診MEN2A大家系RET基因進行多項測序分析，尋找該家系可能存在的RET基因突變，并探尋其分子遺傳學發(fā)病機制及分析臨床特征。

4、 材料與方法：1.研究對象：一個MEN2A大家系，包括先證者兩代共22位成員，其中8名為女性，14名為男性。經(jīng)病理確診為MEN2A的患者共4例。 2.實驗方法：取外周靜脈血提取該家系先證者及其家系成員的基因組DNA，采用聚合酶鏈反應(PCR)擴增RET原癌基因包含的21個外顯子，進而對純化后的PCR擴增產物直接測序及克隆測序，將測序結果與Pubmed上公布的標準序列進行比較分析，判定突變位點及編碼氨基酸序列的變化。同時對存在突變的

5、外顯子PCR擴增產物行限制性內切酶分析。 實驗結果與討論： 1.4例MEN2A患者均存在exon11 D631密碼子(GAC)的雜合缺失，DNA堿基序列由TGCG^ACGAGCTG變?yōu)門GCGAGCTG，導致編碼天冬氨酸的D631密碼子缺失，即D631del；并檢測到患者Ⅱ6的一級親屬Ⅲ10為該基因突變攜帶者。exon11的PCR擴增產物經(jīng)限制性內切酶Hpy991消化處理后，正常序列可被切分為95bp和243bp的兩段，

6、突變序列因缺失酶切位點而不被切分，仍為338b。測序發(fā)現(xiàn)的突變點與Cariff醫(yī)學遺傳學院人類基因突變數(shù)據(jù)庫(http：//www．hgmd．cf．at．uk)收錄的MEN2A相關RET原癌基因突變比較后，確定為國內外首次報道的新突變位點。 2.RET原癌基因外顯子多態(tài)性的測定：家系中未攜帶突變基因者均存在11號外顯子G691S雜合子(GGT/AGT)，691號密碼子由甘氨酸替換為絲氨酸，而突變基因攜帶者未見此多態(tài)性。

7、3.基因型與表現(xiàn)型的聯(lián)系：家系中4名患者均為D631位點突變，雖然每個患者臨床表現(xiàn)存在差異，但也表現(xiàn)出此突變位點特有的臨床特點，即由此基因型決定的獨特的表現(xiàn)型。4名患者的臨床表現(xiàn)與常見的D634位點突變不同的是：30歲后才逐漸發(fā)現(xiàn)病變；均存在腎上腺嗜鉻細胞瘤病變，腎上腺嗜鉻細胞瘤可先于甲狀腺髓樣癌發(fā)生；甲狀腺髓樣癌病變的侵襲力較弱，未見早期淋巴結轉移及遠處轉移；除兩個患者iPTH稍增高外，未見甲狀旁腺病變。 結論： 1.