PLA2G16磷脂酶通過活化MAPK通路促進骨肉瘤的發(fā)展轉(zhuǎn)移及抗藥性.pdf

1、目的：
　　闡明PLA2G16基因的表達與人骨肉瘤發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性，明確PLA2G16磷脂酶在調(diào)節(jié)骨肉瘤轉(zhuǎn)移與惡化過程中的作用機理;探索PLA2G16作為骨肉瘤臨床治療標志物的潛在價值，為確立PLA2G16作為骨肉瘤診斷與治療的新靶點提供依據(jù)。
　　方法：
　　1)逆轉(zhuǎn)錄病毒或慢病毒包裝系統(tǒng)建立PLA2G16穩(wěn)定高表達或敲低的骨肉瘤細胞系，利用這些細胞系分析PLA2G16的高表達或敲低表達分別對細胞增殖(MTTassa

2、y)、遷移(Wound-healing assay)、侵潤(Matrigel Transwell assay)、克隆形成(ColonyFormation)、極性依賴性生長(Soft agar assay)和藥物敏感性的影響。同時對PLA2G16基因進行C113S突變使其失去磷脂酶活性，檢測PLA2G16-C113S對骨肉瘤細胞表型的影響。
　　2)利用qRT-PCR及Western bot等技術(shù)探索PLA2G16促進骨肉瘤發(fā)展轉(zhuǎn)移

3、的作用機制。使用小分子抑制劑分別抑制PLA2G16的磷脂酶活性及其靶蛋白的表達進一步證實PLA2G16是通過發(fā)揮磷脂酶活性而作用其靶蛋白，進而影響骨肉瘤的發(fā)展轉(zhuǎn)移。
　　3)將PLA2G16穩(wěn)定高表達的細胞株通過皮下注射種入裸鼠進行動物實驗，觀察PLA2G16對其成瘤率的影響，并通過Western blot等檢測PLA2G16及其下游蛋白的表達。
　　4)采用組織芯片和免疫組化技術(shù)，檢測骨肉瘤組織中PLA2G16及其靶蛋白的

4、表達;收集骨肉瘤患者的臨床資料分析PLA2G16及其調(diào)控的下游蛋白與骨肉瘤發(fā)生與發(fā)展的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　1) PLA2G16磷脂酶的表達促進了骨肉瘤的增殖，克隆形成能力，極性依賴性生長，侵襲與遷移。
　　2)骨肉瘤細胞中PLA2G16的表達降低了其對傳統(tǒng)化療藥物的敏感性，且這種作用具有時間和劑量累加效應(yīng)。
　　2) PLA2G16的癌基因功能與其細胞核內(nèi)表達相關(guān)并通過活化MAPK通路促進其發(fā)展轉(zhuǎn)移。