HACE1在肝癌中的生物學(xué)特性與其臨床病理學(xué)特征及預(yù)后的關(guān)系.pdf

1、肝細(xì)胞肝癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）（以下簡(jiǎn)稱(chēng)肝癌）是目前世界上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在全球，肝癌的發(fā)病率不斷攀升。流行病學(xué)和實(shí)驗(yàn)研究均表明病毒性肝炎與原發(fā)性肝癌的發(fā)生有著特定的關(guān)系，其中以乙型肝炎與肝癌關(guān)系最為密切。中國(guó)肝癌患者中約90％都存在乙型肝炎病毒(HBV)感染背景，加上其惡性程度高和預(yù)后差等特點(diǎn)，我國(guó)面臨的肝癌形勢(shì)日益嚴(yán)峻。截至目前，傳統(tǒng)外科手術(shù)和肝移植依然是肝癌治療的最佳方案，但由于肝癌起

2、病隱匿，特異性臨床表現(xiàn)缺乏，大多數(shù)病人就診時(shí)已錯(cuò)過(guò)最佳的手術(shù)時(shí)機(jī)，預(yù)后極差。因此，為探索肝癌發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制，改善患者長(zhǎng)期預(yù)后，針對(duì)肝癌相關(guān)分子的研究已成為當(dāng)前的研究熱點(diǎn)。
　　HACE1基因是屬于 HECT家族的E3泛素連接酶(HECT E3)，位于染色體6q21，是多種惡性腫瘤中頻繁發(fā)生突變的一個(gè)位點(diǎn)。HACE1基因最早發(fā)現(xiàn)與腎母細(xì)胞瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)該基因的低表達(dá)或突變與人類(lèi)多種惡性腫瘤相關(guān)，如乳腺

3、癌，結(jié)直腸癌和淋巴瘤等。目前，HACE1基因?qū)Ω伟┑淖饔梦从忻鞔_報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)主要探討HACE1基因在肝癌細(xì)胞中的生物學(xué)特性，研究其對(duì)肝癌發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移的作用及其與肝癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。
　　第一部分：HACE1基因在肝癌細(xì)胞系和肝癌組織中的表達(dá)研究
　　目的：研究 HACE1基因在肝癌細(xì)胞株 Huh7。MHCC97H。HCCLM3。MHCC97L。HepG2。SMCC7721以及肝正常細(xì)胞株L02和肝癌

4、組織及相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)，初步探討其與肝癌發(fā)生的關(guān)系。
　　方法：采用RT?PCR和western blot方法檢測(cè)HACE1基因在肝癌細(xì)胞系、肝正常細(xì)胞株L02和40組肝癌及其相應(yīng)癌旁組織中mRNA和蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：在不同的肝癌細(xì)胞株Huh7。MHCC97H。HCCLM3。MHCC97L。HepG2。SMCC7721中，HACE1基因表達(dá)水平明顯低于肝正常細(xì)胞株 L02，其中 Huh7細(xì)胞中的HACE1基因相

5、對(duì)表達(dá)水平最高，SMCC7721細(xì)胞中HACE1基因相對(duì)表達(dá)水平最低，因此選擇這兩株細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)功能實(shí)驗(yàn)；在肝癌及相應(yīng)癌旁組織中，HACE1在肝癌中的表達(dá)明顯低于癌旁組織。
　　結(jié)論：HACE1是一種重要的腫瘤抑制基因，其突變對(duì)肝癌的發(fā)生具有重要作用。
　　第二部分：HACE1基因表達(dá)水平與肝癌細(xì)胞增殖與遷移的關(guān)系
　　目的：探討HACE1基因?qū)uh7和SMCC7721肝癌細(xì)胞株增殖與遷移的作用。
　　方法：通

6、過(guò)轉(zhuǎn)染HACE1 siRNA脂質(zhì)體與pcDNA3.1-HACE1質(zhì)粒分別沉默和過(guò)表達(dá)Huh7與SMCC7721細(xì)胞中的HACE1基因，從而構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HACE1 siRNA、pcDNA3.1-HACE1的Huh7和SMCC7721肝癌細(xì)胞株；RT?PCR和western blot檢測(cè) HACE1基因的沉默和過(guò)表達(dá)效率；CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)沉默或過(guò)表達(dá)HACE1基因?qū)Ω伟┘?xì)胞增殖能力影響；Transwell和細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)對(duì)肝癌細(xì)胞遷移能

7、力的作用。
　　結(jié)果：成功建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 HACE1 siRNA和 pcDNA3.1-HACE1的Huh7和SMCC7721細(xì)胞株；CCK-8、Transwell和細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)表明HACE1基因表達(dá)下調(diào)能夠明顯促進(jìn)Huh7細(xì)胞的增殖和遷移（P<0.01）；過(guò)表達(dá)HACE1基因能夠明顯抑制SMCC7721細(xì)胞的增殖和遷移能力（P<0.05）。
　　結(jié)論：HACE1基因與肝癌的發(fā)生發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)。
　　第三部分：HACE

8、1基因表達(dá)與肝癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系
　　目的：探討HACE1基因在肝癌組織中的表達(dá)差異與肝癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。
　　方法：采用免疫組化方法檢測(cè)102例肝癌組織中HACE1基因的表達(dá)情況，探討HACE1基因的不同表達(dá)水平與肝癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。
　　結(jié)果：在所有102例患者中，其中75例患者HACE1基因呈低表達(dá)，27例患者HACE1基因呈高表達(dá)，且HACE1基因低表達(dá)的肝癌患者其腫瘤惡性程

9、度更高。肝癌組織中HACE1基因表達(dá)水平的高低與患者血清AFP水平(P<0.001)，腫瘤分期(P<0.05)和血管侵犯密切相關(guān)(P<0.05)，且HACE1基因高表達(dá)的患者5年總體生存率明顯高于低表達(dá)組(P<0.05)。單因素和多因素回歸分析表明血清 AFP水平、腫瘤分期和 HACE1表達(dá)水平不僅能夠影響肝癌患者的總體生存率，同時(shí)也是獨(dú)立的預(yù)后因素。
　　結(jié)論：HACE1基因在肝癌組織中的表達(dá)差異與肝癌的惡性程度和預(yù)后密切相關(guān)。