CTLA-4在慢性HBV感染患者PBMC中表達(dá)水平及臨床意義.pdf

1、全球約2.4億人有慢性HBV感染，中國是HBV感染的高流行區(qū)。目前尚無滿意的方案來徹底治愈慢性HBV感染，HBV感染可導(dǎo)致肝衰竭、肝硬化以及肝癌，沒有特效的治療方法，患者的預(yù)后較差。到目前為止HBV持續(xù)感染及其進(jìn)展的機(jī)制仍不明了。因此加大對HBV感染相關(guān)的基礎(chǔ)研究，為了解其發(fā)病機(jī)制和尋找新的治療思路是有必要的。HBV感染可以誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生以細(xì)胞毒性T細(xì)胞特異性免疫應(yīng)答為主的多種免疫反應(yīng)，來抵抗HBV的感染。研究發(fā)現(xiàn)HBV感染的急性期，活化

2、的特異性CD4+T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞發(fā)生的免疫反應(yīng)能夠發(fā)揮清除病毒作用，其中CD4+T細(xì)胞通過傳遞抗原信號、分泌細(xì)胞因子，維持有效的CD8+T細(xì)胞免疫反應(yīng)來發(fā)揮清除病毒的作用。當(dāng)病毒不能有效清除而持續(xù)復(fù)制，將會導(dǎo)致HBV感染的慢性化，發(fā)展為慢性乙型肝炎并且向肝硬化、肝癌進(jìn)展，HBV感染慢性化的主要原因是HBV特異性T淋巴細(xì)胞耗竭。而當(dāng)免疫活性細(xì)胞的浸潤以及炎性因子的急劇增加也可導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷加重，進(jìn)而發(fā)生肝衰竭，但目前其發(fā)生的機(jī)制仍不

3、明確。Treg細(xì)胞是一類具有免疫抑制作用的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，可對多種免疫細(xì)胞發(fā)揮抑制效應(yīng)。Treg細(xì)胞可以通過細(xì)胞功能分子CTLA-4分子以及分泌IL-10、TGF-β等途徑發(fā)揮免疫抑制作用，通過抑制T淋巴細(xì)胞的活性，可以減少炎性損傷，同時也使病原體得不到徹底清除，導(dǎo)致感染持續(xù)存在。研究表明慢性乙型肝炎患者外周血中Treg細(xì)胞較健康人有所增加，且T淋巴細(xì)胞免疫功能下降，提示Treg細(xì)胞參與到了HBV感染的慢性化中，但具體Treg細(xì)胞在HBV

4、感染患者如何發(fā)揮免疫抑制作用的機(jī)制并不明了。細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4是Treg細(xì)胞上的負(fù)性共刺激分子受體，對Treg細(xì)胞發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)有重要作用，能調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞的增殖、凋亡及其分泌功能，進(jìn)而調(diào)節(jié)機(jī)體免疫，除表達(dá)于Treg細(xì)胞外，還可表達(dá)于活化的CD4+T細(xì)胞發(fā)揮免疫抑制作用。研究表明CTLA-4單克隆抗體阻斷CTLA-4信號可以增強(qiáng)T淋巴細(xì)胞的增殖及活化能力，增強(qiáng)免疫力，已經(jīng)開展了通過CTLA-4單克隆抗體阻斷CTLA-4信號來治療腫

5、瘤類疾病的臨床試驗(yàn)。研究表明，CTLA-4參與到了慢性丙型肝炎的發(fā)病機(jī)制中，且一項(xiàng)CTLA-4阻斷劑治療肝癌的研究中，發(fā)現(xiàn)了CTLA-4阻斷劑的抗丙肝病毒作用，那么CTLA-4阻斷劑是否能用于慢性乙型肝炎的治療，已有研究表明不同的CTLA-4基因型患者，感染HBV后慢性化的風(fēng)險不同。最近的研究發(fā)現(xiàn)HBV感染患者CD8+T細(xì)胞CTLA-4表達(dá)的水平升高，且與病毒載量相關(guān)，提示CTLA-4參與到了慢乙肝的發(fā)病中，但具體機(jī)制并不明了,因此有必

6、要進(jìn)一步研究。本研究從住院病人及門診病人篩選出慢性HBV攜帶者26例（慢性HBV攜帶組），慢性乙型肝炎26例（慢性乙型肝炎組），HBV相關(guān)性肝衰竭24例（HBV相關(guān)性肝衰竭組）以及健康志愿者15例（對照組），檢測HBV感染患者不同炎癥狀態(tài)下PBMC中T細(xì)胞亞群及其表面CTLA-4的表達(dá)水平情況，初步探討CTLA-4在慢性HBV感染患者發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　研究目的：
　　檢測不同炎癥狀態(tài)下慢性HBV感染患者PBMC中T細(xì)胞

7、亞群（CD4+T、CD8+T、Treg）及其CTLA-4的表達(dá)水平情況，初步探討Treg細(xì)胞及CTLA-4在慢性HBV感染患者免疫紊亂機(jī)制中的作用，為尋找新的治療靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。
　　研究方法：
　　研究對象為本院門診及住院患者，篩選出慢性HBV攜帶者26例（慢性HBV攜帶組）、慢性乙型肝炎26例（慢性乙型肝炎組）、HBV相關(guān)性肝衰竭24例（HBV相關(guān)性肝衰竭組），并將HBV相關(guān)性肝衰竭組患者按照預(yù)后分為好轉(zhuǎn)組與惡化組，并

8、以15例健康志愿者作為對照組。
　　應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測各組患者外周血中T淋巴細(xì)胞亞群（CD4+T、CD8+T及Treg細(xì)胞）的分布情況，并檢測CD4+T細(xì)胞及Treg細(xì)胞上CTLA-4的表達(dá)情況；檢測患者肝功能、凝血功能、血清學(xué)標(biāo)志物和HBV-DNA載量，并統(tǒng)計肝衰竭組患者的預(yù)后情況。
　　研究結(jié)果：
　　1.慢性HBV攜帶組、慢性乙型肝炎組CD4+T細(xì)胞低于對照組，HBV相關(guān)性肝衰竭組中CD4+T明顯高于慢性HBV攜

9、帶組及慢性乙型肝炎組；慢性HBV攜帶組、慢性乙型肝炎組、HBV相關(guān)性肝衰竭組CD8+T細(xì)胞低于對照組，慢性HBV攜帶組中CD8+T明顯高于慢性乙型肝炎組及HBV相關(guān)性肝衰竭組；慢性HBV攜帶組、慢性乙型肝炎組、HBV相關(guān)性肝衰竭組Treg細(xì)胞高于對照組，且HBV相關(guān)性肝衰竭組、慢性HBV攜帶組均高于慢性乙型肝炎組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；
　　2.慢性HBV攜帶組、慢性乙型肝炎組、HBV相關(guān)性肝衰竭組CD4+T細(xì)胞中C

10、TLA-4表達(dá)水平高于對照組;慢性HBV攜帶組CD4+T細(xì)胞中CTLA-4表達(dá)水平高于慢性乙型肝炎組、HBV相關(guān)性肝衰竭組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；
　　3.HBV相關(guān)性肝衰竭組Treg細(xì)胞中CTLA-4表達(dá)水平明顯低于慢性HBV攜帶組、對照組、慢性乙型肝炎組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；
　　4.HBV相關(guān)性肝衰竭患者中，惡化組CD4+T細(xì)胞及Treg細(xì)胞上CTLA-4表達(dá)明顯低于好轉(zhuǎn)組，差異均有統(tǒng)計學(xué)