ELP-Intein系統(tǒng)在抗菌肽基因工程中的應(yīng)用.pdf

1、抗菌肽是生物體內(nèi)經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的一類具有生物活性的小分子多肽,存在于多種生物體中,是宿主免疫防御系統(tǒng)的一個重要組成部分。這些抗菌肽能作用于革蘭氏陰性、革蘭氏陽性細菌、真菌、寄生蟲、腫瘤細胞甚至是某些具有包膜的病毒,而絕大多數(shù)抗菌肽對哺乳動物正常細胞無害,并且其殺菌機理與傳統(tǒng)抗生素完全不同,被學(xué)者認為是一種天然抗生素而備受青睞。
　　 近年來,研究者開發(fā)了很多種技術(shù)通過重組表達的策略來獲得抗菌肽。原核表達是目前最常用也是最經(jīng)濟的方法。

2、本實驗利用大腸桿菌表達系統(tǒng)表達兩種抗菌肽,一種是天蠶素家族的家蠶抗菌肽CM4,另一種是防御素家族的人p防御素(HβD4),然后用一種完全無需色譜層析的方法純化獲得目的蛋白。我們將CM4和HβD4的基因克隆入含有類彈性蛋白(ELP)和內(nèi)含肽(Intein)標簽的載體構(gòu)建成表達載體pET-EI-CM4和pET-EI-HβD4。經(jīng)過誘導(dǎo),抗菌肽與這兩種標簽形成的融合蛋白(EI-CM4、EI-HβD4)以完全可溶的形式表達,利用ELP的特殊性狀