ZFAS1在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移的研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開論述：
　　第一部分：ZFAS1在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義
　　目的:
　　檢測(cè)ZFAS1在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)水平，并分析其與臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系。
　　方法:
　　應(yīng)用qRT-PCR方法檢測(cè)159對(duì)結(jié)直腸癌組織及癌旁組織的ZFAS1表達(dá)量，比較兩者ZFAS1表達(dá)量的差異，同時(shí)檢測(cè)了12例結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者原發(fā)腫瘤及轉(zhuǎn)移灶組織ZFAS1的表達(dá)?？ǚ綑z驗(yàn)分析ZFAS1表

2、達(dá)水平與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性;采用Kaplan-Meier方法繪制生存曲線，Log-Rank方法比較ZFAS1高表達(dá)組和低表達(dá)組之間的生存率;采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行多因素分析，以確定校正多因素作用后ZFAS1對(duì)預(yù)后的影響。
　　結(jié)果:
　　159例結(jié)直腸癌組織及其配對(duì)正常組織ZFAS1的表達(dá)檢測(cè)結(jié)果顯示，ZFAS1在結(jié)直腸癌中表達(dá)顯著上調(diào)(P＜0.0001)，其中有76例患者的ZFAS1表達(dá)在結(jié)直腸癌組織中較正常上調(diào)2倍

3、以上;且肝轉(zhuǎn)移組織中ZFAS1的表達(dá)量明顯高于原發(fā)部位（P＜0.05）。結(jié)直腸癌組織中ZFAS1的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.045)及TNM分期（P=0.003）呈正相關(guān)。與低表達(dá)ZFAS1的患者相比，ZFAS1高表達(dá)的患者表現(xiàn)出更差的預(yù)后，其無瘤生存時(shí)間(P=0.012)及總生存時(shí)間均更短(P=0.003)。多因素分析顯示，ZFAS1是結(jié)直腸癌患者無瘤生存時(shí)間(HR=2.132，95％ CI=1.015-4.546，P=0.048)與

4、總生存時(shí)間(HR=1.878，95％ CI=1.006-3.529，P=0.0492)的獨(dú)立預(yù)后因素。
　　結(jié)論:
　　ZFAS1在結(jié)直腸癌組織中高表達(dá)，并與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及高的TNM分期相關(guān)。ZFAS1是結(jié)直腸癌患者腫瘤復(fù)發(fā)和死亡的獨(dú)立預(yù)后因素。
　　第二部分：ZFAS1對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞遷移與侵襲的影響
　　目的:
　　研究ZFAS1對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖、遷移與侵襲的影響。
　　方法:
　　檢測(cè)結(jié)直腸

5、癌細(xì)胞株中ZFAS1的表達(dá)，選擇兩株表達(dá)量較高的細(xì)胞系，應(yīng)用siRNA技術(shù)干擾ZFAS1的表達(dá);采用CCK-8方法研究ZFAS1基因沉默后結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖能力的變化;應(yīng)用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)與Transwell侵襲小室方法研究ZFAS1基因沉默對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響;采用分子克隆技術(shù)構(gòu)建ZFAS1shRNA慢病毒表達(dá)載體，包裝病毒后感染結(jié)直腸癌細(xì)胞，構(gòu)建ZFAS1穩(wěn)定敲降細(xì)胞株;采用裸鼠尾靜脈注射肺轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)，研究ZFAS1基因沉默對(duì)

6、結(jié)直腸癌細(xì)胞體內(nèi)轉(zhuǎn)移能力的影響。
　　結(jié)果:
　　ZFAS1基因沉默對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖沒有明顯影響;沉默ZFAS1能夠抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的體外遷移與侵襲能力及裸鼠肺轉(zhuǎn)移。
　　結(jié)論:
　　ZFAS1能夠抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移。
　　第三部分：ZFAS1影響結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移機(jī)制的初步研究
　　目的:
　　初步研究ZFAS1影響結(jié)直腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制。
　　方法:
　　應(yīng)用qRT

7、-PCR法及Western blot法檢測(cè)在ZFAS1穩(wěn)定敲降的結(jié)直腸癌細(xì)胞中EMT相關(guān)基因的表達(dá);應(yīng)用siRNA技術(shù)干擾ZEB1的表達(dá)，驗(yàn)證ZEB1與E-鈣粘素(E-cad)及波形蛋白(VIM)的關(guān)系;雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證ZEB1是否是miR-150-5p的靶基因;應(yīng)用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)與Transwell侵襲小室方法研究miR-150-5p與ZEB1對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響;通過熒光素酶實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell侵襲小

8、室方法研究ZFAS1與miR-150-5p的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　ZFAS1敲降后，結(jié)直腸癌細(xì)胞中上皮細(xì)胞標(biāo)志E-cad表達(dá)顯著上升，而間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志VIM和ZEB1表達(dá)顯著下降;ZEB1能夠調(diào)節(jié)E-cad及VIM的表達(dá);miR-150-5p通過靶向作用于ZEB1抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的遷移與侵襲;ZFAS1與miR-150-5p結(jié)合，封閉了miR-150-5p的抑癌作用。
　　結(jié)論:
　　ZFAS1與miR-150-