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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:整理睡眠剝奪與酸棗仁湯的相關(guān)文獻(xiàn),結(jié)合本課題組前期研究基礎(chǔ),通過(guò)建立老年大鼠慢性睡眠剝奪模型,探討酸棗仁湯對(duì)老年失眠大鼠下丘腦視交叉上核系統(tǒng)和下丘腦腹外側(cè)視前區(qū)系統(tǒng)及兩者投射關(guān)系的作用及作用機(jī)制。
方法:
理論探討:查閱睡眠剝奪與酸棗仁湯的相關(guān)文獻(xiàn),對(duì)經(jīng)典的理論內(nèi)容以及前沿的科學(xué)研究進(jìn)行總結(jié),明確睡眠覺(jué)醒調(diào)節(jié)機(jī)制以及酸棗仁湯的藥效物質(zhì)基礎(chǔ),探討酸棗仁湯對(duì)睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的睡眠調(diào)節(jié)機(jī)制。
實(shí)驗(yàn)探討:選取
2、SPF級(jí)SD老年大鼠,用自制睡眠剝奪箱剝奪快動(dòng)眼睡眠21d,連續(xù)給藥14d,其檢測(cè)指標(biāo)如下:
1.酸棗仁湯對(duì)老年慢性睡眠剝奪大鼠心肌細(xì)胞凋亡及 bcl-2、bax蛋白表達(dá)的影響
Tunel染色法觀察慢性睡眠剝奪后大鼠心肌細(xì)胞凋亡情況,免疫組織化學(xué)染色法觀察慢性睡眠剝奪后大鼠心肌細(xì)胞bcl-2、bax表達(dá)的變化。
2.酸棗仁湯對(duì)老年慢性睡眠剝奪大鼠SCN系統(tǒng)的影響
透射電鏡觀察大腦下丘腦視交叉上核部
3、位形態(tài)學(xué)改變。采用免疫組織化學(xué)染色法觀察c-fos蛋白表達(dá)的變化。
免疫組織化學(xué)染色法以及Realtime-PCR法觀察SCN中vSPZ和DMH區(qū)內(nèi)第二信使NO合成酶(nNOS)以及VIP、AVP神經(jīng)元表達(dá)的變化。
3.酸棗仁湯對(duì)老年慢性睡眠剝奪大鼠VLPO系統(tǒng)的影響
免疫組化染色法和免疫熒光染色法觀察甘丙肽表達(dá)的變化。
尼氏染色法檢測(cè)VLPO神經(jīng)元表達(dá)的變化。
免疫組化染色法和免疫熒光
4、染色法觀察 GABA表達(dá)的變化, Realtime-PCR法檢測(cè)下丘腦γ-氨基丁酸A受體(GABAAR)α1和γ2亞單位的表達(dá)。
采用熒光分光光度法檢測(cè)5-HT含量,Realtime-PCR法檢測(cè)下丘腦5-HT1AR、5-HT2ARmRNA表達(dá)的變化。
結(jié)果:
1.酸棗仁湯對(duì)老年慢性睡眠剝奪大鼠心肌細(xì)胞凋亡及bcl-2、bax蛋白表達(dá)的影響
Tunel染色法觀察心肌凋亡細(xì)胞凋亡情況實(shí)驗(yàn)結(jié)果與環(huán)境對(duì)
5、照組比較,慢性睡眠剝奪模型組凋亡細(xì)胞數(shù)明顯增加(P<0.05);與慢性睡眠剝奪模型組比較,舒樂(lè)安定組和酸棗仁湯組凋亡細(xì)胞數(shù)有不同程度的減少(P<0.05)。
免疫組織化學(xué)染色法觀察 bcl-2、bax表達(dá)的結(jié)果與環(huán)境對(duì)照組比較,慢性睡眠剝奪模型組bcl-2、bax活性均呈現(xiàn)上升趨勢(shì)(P<0.05);與慢性睡眠剝奪模型組比較,舒樂(lè)安定組和酸棗仁湯組相bcl-2、bax明顯降低(P<0.05)。
2.酸棗仁湯對(duì)老年慢性睡
6、眠剝奪大鼠SCN系統(tǒng)的影響
SCN形態(tài)超微病理學(xué)觀察結(jié)果與環(huán)境對(duì)照組比較,慢性睡眠剝奪模型組 SCN神經(jīng)元中脂褐素(Lipo)增多增大,擴(kuò)張腫脹的 Golgi囊泡明顯增多。與慢性睡眠剝奪組比較,舒樂(lè)安定組和酸棗仁湯組則LIPO相對(duì)減少并且變小。其中酸棗仁湯組變化最為顯著。
與環(huán)境對(duì)照組比較,慢性睡眠剝奪模型組nNos、c-fos mRNA表達(dá)上調(diào);與慢性睡眠剝奪模型組比較,舒樂(lè)安定組和酸棗仁湯組 c-fos、nNos
7、 mRNA表達(dá)下調(diào)。
與環(huán)境對(duì)照組比較,慢性睡眠剝奪模型組 VIP、AVP mRNA表達(dá)下調(diào),;與慢性睡眠剝奪模型組比較,舒樂(lè)安定組和酸棗仁湯組VIP、AVP mRNA表達(dá)上調(diào)。
免疫組織化學(xué)染色結(jié)果與環(huán)境對(duì)照組比較,慢性睡眠剝奪模型組AVP、VIP表達(dá)減少,nNos、c-fos表達(dá)增加(P<0.05);與慢性睡眠剝奪模型組比較,舒樂(lè)安定組和酸棗仁湯組AVP、VIP表達(dá)增加,nNos、c-fos表達(dá)減少(P<0.05
8、)。
3.酸棗仁湯對(duì)老年慢性睡眠剝奪大鼠VLPO系統(tǒng)的影響
與環(huán)境對(duì)照組比較,慢性睡眠剝奪模型組下丘腦5-HT1AmRNA表達(dá)下調(diào),5-HT2AmRNA表達(dá)上調(diào);與慢性睡眠剝奪模型組比較,舒樂(lè)安定組和酸棗仁湯組下丘腦5-HT1AmRNA表達(dá)上調(diào),5-HT2AmRNA表達(dá)下調(diào)。
與環(huán)境對(duì)照組比較,慢性睡眠剝奪模型組下丘腦GABAARα1、GABAARγ2 mRNA表達(dá)水平上調(diào);與慢性睡眠剝奪模型組比較,舒樂(lè)安
9、定組和酸棗仁湯組GABAARα1、GABAARγ2 mRNA表達(dá)水平下調(diào)。
與環(huán)境對(duì)照組比較,慢性睡眠剝奪模型組GABA、甘丙肽表達(dá)減少(P<0.05);與慢性睡眠剝奪模型組比較,舒樂(lè)安定組和酸棗仁湯組大鼠下丘腦GABA、甘丙肽表達(dá)增加(P<0.05)。
熒光分光光度法檢測(cè)大鼠下丘腦部位5-HT含量結(jié)果分析與環(huán)境對(duì)照組相比較,慢性睡眠剝奪模型組5-HT相對(duì)表達(dá)量降低(P<0.05)。與慢性睡眠剝奪模型組相比較,舒樂(lè)安
10、定組和酸棗仁湯組5-HT含量有不同程度的升高(P<0.05)。
尼氏染色法檢測(cè)VLPO神經(jīng)元表達(dá)結(jié)果環(huán)境對(duì)照組大鼠VLPO神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)正常,排列緊密,細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整,細(xì)胞核呈圓形或橢圓形,核仁清晰,胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)豐富的尼氏小體。慢性睡眠剝奪后大鼠染色情況發(fā)生明顯變化,細(xì)胞排列疏松,部分神經(jīng)元胞體皺縮,胞質(zhì)內(nèi)尼氏小體減少。
免疫熒光染色法檢測(cè)GABA、甘丙肽表達(dá)的結(jié)果與環(huán)境對(duì)照組相比,慢性睡眠剝奪模型組GABA、甘丙肽神經(jīng)
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