材用優(yōu)良無(wú)性系雜交柳遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究.pdf

1、柳樹具有速生、成材早等優(yōu)點(diǎn),并且具有一定的抗旱、耐鹽、耐瘠薄、抗風(fēng)沙能力,在維持生態(tài)平衡中起著很重要的作用,同時(shí)也是良好的園林綠化樹種.試驗(yàn)以柳樹優(yōu)良雜交品種J795、J797和J799的莖段為外植體建立了無(wú)菌快繁體系,研究了影響愈傷組織誘導(dǎo)的各種因素及繼代增殖情況,對(duì)愈傷組織的形態(tài)解剖結(jié)構(gòu)進(jìn)行了石蠟切片觀察研究,同時(shí)對(duì)柳樹的遺傳轉(zhuǎn)化進(jìn)行了初步研究探索.主要研究結(jié)果如下:1.柳樹無(wú)菌快繁體系的建立:以柳樹的莖段為外植體建立無(wú)菌快繁體系,

2、其誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS和MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L.繼代培養(yǎng)中采用高低生長(zhǎng)激素交替使用,效果較好.培養(yǎng)基為:MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.05mg/L, MS+6-BA0.2～0.3mg/L+NAA0.1mg/L生根培養(yǎng)基:(1)1/2MS,(2)MS+NAA0.2mg/L.2.愈傷組織的誘導(dǎo)中,適于柳樹葉片愈傷誘導(dǎo)的激素配比為:MS+NAA(0.5～1.0)mg/L+2.4-D(0.2～0.5)mg/L

3、,MS+BA(1.0～2.0)mg/L+NAA(0.5～1.0)mg/L.KT、ZT、TDZ等不適合愈傷組織的誘導(dǎo).愈傷組織繼代培養(yǎng)中,細(xì)胞分裂素6-BA的濃度高于6mg/L時(shí)容易產(chǎn)生玻璃化現(xiàn)象.TDZ在愈傷組織繼代培養(yǎng)中作用時(shí)間較長(zhǎng),4～6個(gè)月仍可以保持生活力.試驗(yàn)中偶爾得到部分再生植株,有器官直接再生也有通過(guò)愈傷組織間接再生成苗,但是誘導(dǎo)率很低,而且大多不能進(jìn)一步分化繁殖,在以后的培養(yǎng)中逐漸黃化死亡.3.愈傷組織的細(xì)胞學(xué)觀察對(duì)得到的

4、愈傷組織進(jìn)行分類及細(xì)胞觀察,結(jié)果表現(xiàn)了形態(tài)結(jié)構(gòu)的一致性,石蠟切片顯示,葉片組織脫分化的起始部位在微管束鞘;胚性細(xì)胞多發(fā)生在所形成的愈傷組織的表層或近表層,和非胚性細(xì)胞在形態(tài)和細(xì)胞學(xué)上有很大差別,細(xì)胞核大、質(zhì)濃,與周圍細(xì)胞存在生理隔離;多細(xì)胞原胚以平周分裂為主,并由此表現(xiàn)出有序生長(zhǎng);胚性細(xì)胞內(nèi)含有豐富的淀粉粒,隨細(xì)胞的分裂和分化逐漸減少.4.柳樹遺傳轉(zhuǎn)化的初步研究以莖段為外植體進(jìn)行了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化研究,對(duì)柳樹的遺傳轉(zhuǎn)化進(jìn)行了初步探討,摸