觀賞用柳樹無性系再生體系的建立及其遺傳轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、金絲垂柳J1010((Salix×aureo-pendula cl."J1010")屬楊柳科、柳屬;落葉喬木,葉披針形,枝條下垂,黃色,樹姿優(yōu)美,枝條顏色鮮艷(小枝生長季節(jié)呈黃綠色,休眠季節(jié)呈金黃色)抗病性強(qiáng),雄株,春季不飛絮,不會(huì)造成環(huán)境污染,生長快;喜光,喜溫暖濕潤氣候和濕潤、深厚的土壤,但對土壤適應(yīng)性較強(qiáng),耐水濕,在河邊生長尤好;在土層深厚、地勢干燥的地區(qū)也能正常生長,萌芽力強(qiáng). 本文研究金絲垂柳J010的組培再生體系,并

2、利用石蠟切片技術(shù)對不同濃度、不同激素的愈傷組織進(jìn)行了細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察的研究,目的是研究影響金絲垂柳兒010再生的不同因素;通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法對金絲垂柳兒010進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化研究,經(jīng)過抗生素篩選培養(yǎng),獲得了轉(zhuǎn)基因抗性愈傷組織,并通過GUS組織化學(xué)染色對轉(zhuǎn)基因愈傷組織進(jìn)行了初步檢測.1.金絲垂柳兒010組織培養(yǎng)再生體系的建立無菌材料快繁以MS+6.BA0.1mg/L+NAA0.2mg/L和MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L交替

3、使用最佳;以葉片、莖段作為外植體在分別附加BA1.0 mg/L+NAA0.1mg/L和6-BA1.0mg/L+2,4-D0.1mg/L的MS培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織效果最好,愈傷組織誘導(dǎo)率可達(dá)100﹪;生根培養(yǎng)基為1/2MS附加NAA0.3mg/L,生根效果較好.2.胚性愈傷組織的建立愈傷組織誘導(dǎo)結(jié)果表明在愈傷組織誘導(dǎo)過程中,在MS培養(yǎng)基中添加1.0～2.0mg/L的6-BA和0.1～0.5mg/L的NAA能誘導(dǎo)出胚性愈傷組織.3.BADH

4、基因轉(zhuǎn)化體系的建立500mg/L,的頭孢霉素(Cef)作為抗菌素抑制和去除農(nóng)桿菌最佳,且對愈傷組織和組培苗生長影響不大.在卡那霉素(Kan)50mg/L時(shí)愈傷組織褐化死亡率達(dá)97.6﹪,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo),以葉片作為外植體進(jìn)行侵染,用1/2YEB和1/2MS液體培養(yǎng)基活化農(nóng)桿菌;菌液濃度OD<,600>值0.5,預(yù)培養(yǎng)時(shí)間4天,共培養(yǎng)時(shí)間2天有利于提高轉(zhuǎn)化率;轉(zhuǎn)化后的外植體經(jīng)GUS檢測,顏色為淡藍(lán)色,說明外源基因初步整合到植株基因組DNA中