蓖麻下胚軸再生體系的建立及遺傳轉(zhuǎn)化初探.pdf

1、本試驗以蓖麻成熟種子為原材料，預(yù)培養(yǎng)后切取下胚軸作為外植體，系統(tǒng)研究了蓖麻離體培養(yǎng)過程中所涉及的各種影響因素。并且，初步研究了農(nóng)桿菌介導(dǎo)蓖麻下胚軸外植體的遺傳轉(zhuǎn)化。結(jié)果表明:
　　1、對原材料的最佳消毒方法是:對成熟的蓖麻種子去殼處理，先用流水緩慢沖洗30min，無菌條件下，用體積分數(shù)為75％的酒精消毒30sec，無菌水沖洗3～5次;再用質(zhì)量分數(shù)0.1％升汞浸泡3min，無菌水沖洗6～8次，在適宜的條件下培養(yǎng)后可以獲得極低的污染率

2、和較高的發(fā)芽率。
　　2、在保證極低污染率的基礎(chǔ)上，對預(yù)培養(yǎng)種子培養(yǎng)基硬度進行優(yōu)化，當瓊脂粉濃度為9g/L時，可以提高種子的發(fā)芽率，以獲得更多優(yōu)質(zhì)的下胚軸外植體。
　　3、使用改良培養(yǎng)基:MS+20g/L蔗糖+9g/L瓊脂，pH=5.6～5.8，誘導(dǎo)叢生芽，添加100mg/L抗壞血酸可以有效防治材料褐化，當TDZ濃度為0.3mg/L時，將剛接種的外植體置于適宜的條件下黑暗預(yù)處理6d后再轉(zhuǎn)移到光照強度為1000～1500lx，

3、晝/夜循環(huán)為16/8h每天的條件下進行培養(yǎng)，叢生芽誘導(dǎo)效果最好。
　　4、誘導(dǎo)不定芽伸長時，篩選出的最佳培養(yǎng)基為1/2MS+0.2mg/LGA3+0.1mg/LTDZ+20g/L蔗糖+9g/L瓊脂，pH為5.6～5.8。添加100mg/L抗壞血酸，繼代周期由原來的每2～3周繼代一次變成每隔10天繼代一次，可以顯著降低材料的玻璃化率。
　　5、蓖麻不定芽最佳生根培養(yǎng)基的篩選結(jié)果為1/2MS+0.2mg/LNAA+20g/L蔗糖

4、+9g/L瓊脂+100mg/L抗壞血酸，pH=5.6～5.8。
　　6、采用上述篩選出的各階段最適培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件對蓖麻材料進行培養(yǎng)，形成無菌苗，無菌苗在三角瓶中能長出新葉，葉片為嫩綠色，根很健壯，無菌幼苗移栽后成活率高。
　　7、對蓖麻下胚軸外植體進行抗生素Km耐受壓篩選，結(jié)果表明，蓖麻下胚軸外植體的抗生素選擇壓培養(yǎng)基為MS+0.30mg/LTDZ+100mg/L抗壞血酸+20g/L蔗糖+9g/L瓊脂+Km200mg/L，