磁場(chǎng)結(jié)合阿霉素對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷效應(yīng)的初步研究.pdf

1、目的：研究磁場(chǎng)結(jié)合阿霉素對(duì)貼壁生長(zhǎng)的腫瘤細(xì)胞協(xié)同殺傷的細(xì)胞學(xué)機(jī)制，并進(jìn)一步探究磁場(chǎng)造成細(xì)胞周期阻滯的可能原因。 方法： 1．采用MTT法檢測(cè)磁場(chǎng)、阿霉素及磁場(chǎng)+阿霉素對(duì)貼壁生長(zhǎng)的腫瘤細(xì)胞(SMMC-7721、HepG-2和SW480)增殖的影響。 2．通過光學(xué)顯微鏡、原子力顯微鏡、單細(xì)胞凝膠電泳、流式細(xì)胞儀等手段，檢測(cè)磁場(chǎng)結(jié)合阿霉素對(duì)腫瘤細(xì)胞的協(xié)同殺傷效應(yīng)。 3．采用MTT檢測(cè)、細(xì)胞同步化、免疫熒

2、光法及檢測(cè)活性氧自由基(ROS)等方法進(jìn)一步研究磁場(chǎng)及磁場(chǎng)聯(lián)合阿霉素殺傷腫瘤細(xì)胞的機(jī)制。 結(jié)果： 1．(1)SMMC-7721細(xì)胞以1×10<'5> cells/mL的細(xì)胞密度接種，曝磁6h，即可對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)造成顯著的抑制效應(yīng)(p<0.05)；細(xì)胞以5×10<'4> cells/mL的密度接種，曝磁9h穩(wěn)恒磁場(chǎng)對(duì)其生長(zhǎng)有極顯著的抑制作用(p<0.01)。(2)HepG-2細(xì)胞以1×10<'5>cells/mL和5×10

3、<'4> cells/mL的細(xì)胞密度接種，磁場(chǎng)處理24h，即對(duì)細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用(p<0.01)。(3)SW480細(xì)胞分別以1×10<'5> cells/mL和5×10<'4> cells/mL的密度接種，MTT檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：磁場(chǎng)分別處理36h和24h即對(duì)SW480細(xì)胞增殖造成明顯的抑制效應(yīng)(p<0.01)。 2．(1)SMMC-7721細(xì)胞以1×10<'5> cells/mL的細(xì)胞密度接種，40ng/mLN霉素單獨(dú)處理細(xì)胞

4、6h可引起細(xì)胞生長(zhǎng)抑制(p<0.05)；5ng/mL阿霉素與磁場(chǎng)聯(lián)合作用5h即對(duì)細(xì)胞有殺傷作用(p<0.05)；細(xì)胞接種密度為5×10<'4> cells/mL時(shí)，5ng/mL阿霉素單獨(dú)處理細(xì)胞9h可對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)造成明顯的抑制效應(yīng)(p<0.05)，而聯(lián)合磁場(chǎng)時(shí)，作用時(shí)間僅用8d,時(shí)、阿霉素濃度僅需要0.2ng/mL即對(duì)細(xì)胞有殺傷作用(p<0.05)。(2)HepG-2細(xì)胞以1×10<'5> cells/mL的細(xì)胞密度接種，10ng/mL阿

5、霉素單獨(dú)處理細(xì)胞12h即可引起細(xì)胞生長(zhǎng)抑制(p<0.05)；聯(lián)合磁場(chǎng)作用時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)抑制所需的阿霉素濃度降低到1ng/mL。當(dāng)細(xì)胞以5×10<'4> cells/mL的密度接種時(shí)，100ng/mL阿霉素單獨(dú)處理細(xì)胞12h可對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)造成明顯的抑制效p<0.05，結(jié)合磁場(chǎng)共同作用時(shí)，阿霉素的濃度只需10ng/mL (p<0.05)。(3)SW480細(xì)胞以1×10<'5> cells/mL的細(xì)胞密度接種，50ng/mL阿霉素單獨(dú)處理細(xì)胞12

6、h即可引起細(xì)胞生長(zhǎng)抑制 (p<0.05)，阿霉素聯(lián)合磁場(chǎng)作用時(shí)的濃度可下降到22.5ng/mL(p<0.05)；細(xì)胞低密度(5×10<'4> cells/mL)生長(zhǎng)時(shí)，30ng/mL阿霉素單獨(dú)處理細(xì)胞12h可抑制細(xì)胞生長(zhǎng)p<0.05，聯(lián)合磁場(chǎng)作用時(shí)，阿霉素的濃度可減少到5ng/mL(p<0.05)。 3．(1)HE染色結(jié)果及倒置顯微鏡觀察處理前后細(xì)胞的形態(tài)變化，發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組細(xì)胞相比，曝磁組細(xì)胞略微鼓起；阿霉素組細(xì)胞隆起、回縮，

7、貼壁性能降低；磁場(chǎng)+阿霉素組細(xì)胞回縮變圓，細(xì)胞邊緣粗糙，少量細(xì)胞漂浮，視野中可見細(xì)胞碎片。(2)原子力顯微鏡觀察細(xì)胞表面的微細(xì)結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)曝磁組細(xì)胞表面較為粗糙，表面有向外的隆起，且有數(shù)量增多的凹陷存在；細(xì)胞經(jīng)阿霉素處理后，表面破損并出現(xiàn)孔洞結(jié)構(gòu)；當(dāng)二者聯(lián)合作用時(shí)，細(xì)胞表面出現(xiàn)較大較深的不規(guī)則孔洞，且孔洞周邊隆起，表面破壞嚴(yán)重。(3)磁場(chǎng)、阿霉素以及磁場(chǎng)聯(lián)合阿霉素處理腫瘤細(xì)胞后，細(xì)胞周期分布均發(fā)生改變；不同組織來源、不同分化程度的腫瘤細(xì)胞

8、之間存在差異。SW480和SMMC-7721細(xì)胞曝磁后，G2/M期細(xì)胞比例增多；而HepG-2細(xì)胞經(jīng)磁場(chǎng)處理后，G1期細(xì)胞比例增加。磁場(chǎng)結(jié)合阿霉素處理，SMMC-7721細(xì)胞G2/M期細(xì)胞比例增多，而SW480與HepG-2細(xì)胞G1期細(xì)胞比例升高。(4)單細(xì)胞凝膠電泳檢測(cè)顯示，阿霉素處理可引起細(xì)胞DNA損傷，曝磁組細(xì)胞未檢測(cè)到DNA損傷，然而當(dāng)磁場(chǎng)聯(lián)合阿霉素作用后，檢測(cè)到細(xì)胞DNA發(fā)生嚴(yán)重?fù)p傷，與阿霉素組相比存在極顯著差異(p<0.01

9、)。 4．(1)當(dāng)SMMC-7721、HepG-2以及SW480三種腫瘤細(xì)胞以不同密度接種，磁場(chǎng)結(jié)合不同濃度阿霉素處理不同時(shí)間，ROS檢測(cè)得到一致實(shí)驗(yàn)結(jié)果：?jiǎn)渭兇艌?chǎng)、單純阿霉素及磁場(chǎng)結(jié)合阿霉素作用細(xì)胞后，與對(duì)照組相比，ROS均有明顯增加(p<0.01)。(2)不同周期時(shí)相K562細(xì)胞，對(duì)磁場(chǎng)或/和阿霉素處理的敏感性存在差異，其中對(duì)磁場(chǎng)的敏感性排序如下：S期>G2期、M期；對(duì)阿霉素的敏感性次序稍有變化：S期>G2期>M期。(3)

10、不同周期時(shí)相cyclinB1在細(xì)胞中處于不同位置，G1期、S期時(shí)位于細(xì)胞質(zhì)；G2期時(shí)開始由細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)入細(xì)胞核；G2/M、M期早期時(shí)位于細(xì)胞核。經(jīng)過不同時(shí)間曝磁處理后，對(duì)照組細(xì)胞中cyclin B1定位于細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞群體中S期細(xì)胞比例較大；實(shí)驗(yàn)組中大多數(shù)細(xì)胞cyclin B1已經(jīng)轉(zhuǎn)定位于細(xì)胞核， G2/M期細(xì)胞在整個(gè)細(xì)胞群體中比例增多。 結(jié)論：通過對(duì)細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞周期分布及細(xì)胞DNA損傷的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：穩(wěn)恒磁場(chǎng)與阿霉素對(duì)腫瘤細(xì)胞存在協(xié)