表阿霉素與白藜蘆醇聯(lián)合用藥對(duì)多種人類腫瘤細(xì)胞的作用.pdf

1、惡性腫瘤的治療是一個(gè)世界性的難題，聯(lián)合用藥是提高腫瘤治療效果的途徑之一。本文研究了表阿霉素與白藜蘆醇聯(lián)合用藥在體外對(duì)提高腫瘤細(xì)胞抑制率的影響。白藜蘆醇是一種主要存在于葡萄中的天然分子，具有多種生物學(xué)效應(yīng)，如抗腫瘤、抗氧化、抗突變、抗炎癥以及降低血糖等。它對(duì)腫瘤的發(fā)生、促進(jìn)和發(fā)展三個(gè)階段都有明顯的抑制作用。表阿霉素是多種癌癥的臨床一線用藥，它是一種細(xì)胞周期非特異性的藥物，其主要作用部位是細(xì)胞核。表阿霉素能迅速透入到體外培養(yǎng)的細(xì)胞胞內(nèi)，進(jìn)入

2、細(xì)胞核與DNA結(jié)合，從而抑制核酸的合成和有絲分裂。目前關(guān)于表阿霉素與白藜蘆醇聯(lián)合用藥作用的研究極少，缺乏針對(duì)多種常見(jiàn)腫瘤的相關(guān)研究。為評(píng)價(jià)表阿霉素與白藜蘆醇聯(lián)合用藥對(duì)多種腫瘤細(xì)胞協(xié)同抑制作用，本文以人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系A(chǔ)172和T98G、人肺癌細(xì)胞系H838、人宮頸癌細(xì)胞系Hela、人肝癌細(xì)胞系HepG2、人乳腺癌細(xì)胞系MCF7、人胃癌細(xì)胞系MGC803和人正常肝細(xì)胞系L02為對(duì)象，研究了表阿霉素與白藜蘆醇單獨(dú)及聯(lián)合用藥對(duì)上述細(xì)胞系的抑制作用

3、。通過(guò)顯微鏡觀察單獨(dú)及聯(lián)合用藥處理后MCF7和MGC803細(xì)胞形態(tài)的改變，流式分析細(xì)胞周期分布，初步探討了表阿霉素與白藜蘆醇聯(lián)合用藥的作用機(jī)制。
　　 為研究單獨(dú)及聯(lián)合用藥對(duì)細(xì)胞的抑制情況，本文實(shí)驗(yàn)以上述8種腫瘤細(xì)胞系為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，采用濃度依次為25uM、50uM、100uM、200uM和400uM的白藜蘆醇與濃度依次為0.1uM、1uM、5uM、10uM和20uM的表阿霉素單獨(dú)給藥，分別得到兩種藥物單獨(dú)給藥時(shí)對(duì)8種細(xì)胞系抑制作用

4、的劑量反應(yīng)曲線。其次，用濃度為1uM的表阿霉素與濃度分別為25uM、50uM和100uM的白藜蘆醇聯(lián)合用藥，MTS法檢測(cè)藥物處理對(duì)細(xì)胞增殖的抑制，觀察聯(lián)合用藥的增效作用。細(xì)胞形態(tài)變化可通過(guò)光學(xué)顯微鏡進(jìn)行觀察；碘化丙啶(Propidium iodide，PI)單染法可以通過(guò)熒光顯微鏡直接觀察到發(fā)生凋亡或壞死細(xì)胞。由于表阿霉素與白藜蘆醇都與細(xì)胞周期抑制有關(guān)，本實(shí)驗(yàn)同時(shí)采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期分布變化，評(píng)估單獨(dú)及聯(lián)合用藥后細(xì)胞周期的變化。<

5、br>　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明不同劑量的表阿霉素與白藜蘆醇單獨(dú)給藥時(shí)，對(duì)上述各種細(xì)胞系均有抑制作用，在本實(shí)驗(yàn)所用劑量范圍內(nèi)，抑制率與濃度成正相關(guān)效應(yīng)。聯(lián)合用藥對(duì)MCF7和MGC803細(xì)胞協(xié)同抑制效果明顯，1uM的表阿霉素單獨(dú)給藥對(duì)MCF7細(xì)胞的抑制率為33％，25uM的白藜蘆醇單獨(dú)給藥對(duì)MCF7細(xì)胞的抑制率為7%，而聯(lián)合用藥對(duì)MCF7細(xì)胞的抑制率為63%，遠(yuǎn)高于單獨(dú)給藥抑制率的加和(P＜0.01)。在MGC803細(xì)胞系中也觀察到了類似的協(xié)同

6、抑制效果。進(jìn)一步選取MCF7和MGC803細(xì)胞系進(jìn)行了形態(tài)觀察和細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)：光學(xué)和熒光顯微鏡觀察對(duì)照組和白藜蘆醇處理組細(xì)胞形態(tài)基本正常，白藜蘆醇處理組細(xì)胞出現(xiàn)輕微凋亡，而表阿霉素處理組和聯(lián)合用藥組細(xì)胞形態(tài)異常，并出現(xiàn)大量凋亡及壞死細(xì)胞。流式結(jié)果顯示白藜蘆醇主要將細(xì)胞抑制在S期，而表阿霉素對(duì)細(xì)胞各周期都有抑制作用，主要將細(xì)胞抑制在G2/M期，聯(lián)合用藥組細(xì)胞出現(xiàn)大量凋亡或壞死，處于正常生命周期中的細(xì)胞比例減少。
　　 本課題在體外