貫葉連翹提取物對(duì)三氯化鋁暴露大鼠海馬腦區(qū)的保護(hù)作用及機(jī)制.pdf

1、鋁是一種蓄積性強(qiáng)神經(jīng)毒物，可通過改變海馬腦區(qū)氧化應(yīng)激水平、炎性反應(yīng)、β樣淀粉蛋白(Aβ)表達(dá)、樹突棘密度導(dǎo)致人或其他模型動(dòng)物認(rèn)知功能障礙，且目前尚無有效的治療手段。貫葉連翹提取物（Hypericum perforatum extract，HP）是一種天然植物藥物，具有抗氧化、抗炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)Aβ生成和維持樹突棘穩(wěn)定的藥理作用。HP對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的保護(hù)機(jī)制和藥理作用均與鋁神經(jīng)毒理機(jī)制相拮抗，故推測(cè)HP可保護(hù)鋁暴露大鼠神經(jīng)系統(tǒng)免受鋁毒危害。

2、
　　為探討HP對(duì)AlCl3暴露大鼠海馬腦區(qū)的保護(hù)作用及機(jī)制，本研究選用8周齡雄性Wistar大鼠120只，隨機(jī)分為空白組（C組）、染鋁組(Al組:按150mg/kg的劑量灌胃給予AlCl390d);HP干預(yù)組(Al+HP組:按150mg/kg的劑量灌胃給予AlCl390d;給予AlCl330d后，按300mg/kg的劑量灌胃給予HP60d)和HP對(duì)照組(HP組:按300mg/kg的劑量灌胃給予HP60d)。給藥結(jié)束后，通過Mor

3、ris水迷宮和曠場(chǎng)行為試驗(yàn)，探究HP對(duì)AlCl3暴露大鼠認(rèn)知功能的影響;通過對(duì)大鼠體重和腦組織質(zhì)量的稱量及海馬鋁含量的檢測(cè)，探究HP對(duì)AlCl3暴露大鼠腦體系數(shù)的影響;通過檢測(cè)海馬腦區(qū)ROS、GSH、MDA、8-OHdG和羰基含量，SOD活性，Nrf2核蛋白和總蛋白表達(dá)以及OH-1、GCLC和NQO1 mRNA表達(dá)，觀測(cè)海馬腦區(qū)超微結(jié)構(gòu)，探究HP對(duì)AlCl3暴露大鼠海馬腦區(qū)氧化應(yīng)激和Nrf2信號(hào)的影響;通過檢測(cè)海馬腦區(qū)MHCⅡ和GFAP

4、蛋白表達(dá)，IL-6和TNF-α含量，NF-κB核蛋白和總蛋白表達(dá)以及IL-6和TNF-α mRNA表達(dá)，探究HP對(duì)AlCl3暴露大鼠海馬腦區(qū)炎癥反應(yīng)和NF-κB信號(hào)的影響;通過檢測(cè)海馬腦區(qū)Aβ42含量，淀粉樣斑塊生成狀況以及APP、ADAM9、ADAM10、ADAM17、BACE1、PS1和PS2 mRNA表達(dá)，探究HP對(duì)AlCl3暴露大鼠海馬腦區(qū)Aβ及其相關(guān)生成因子影響;通過檢測(cè)海馬腦區(qū)樹突棘密度、BDNF蛋白表達(dá)和F-actin/G

5、-actin蛋白比率，探究HP對(duì)AlCl3暴露大鼠海馬腦區(qū)樹突棘密度及其調(diào)節(jié)因子的影響。
　　試驗(yàn)結(jié)果:
　　(1) Morris水迷宮試驗(yàn)顯示，Al組到達(dá)平臺(tái)時(shí)間顯著高于C組(p＜0.05)，目標(biāo)象限滯留時(shí)間和穿越平臺(tái)位置次數(shù)量顯著低于C組(p＜0.01);曠場(chǎng)探索試驗(yàn)顯示，Al組穿越方格個(gè)數(shù)和站立次數(shù)均顯著低于C組(p＜0.05)，說明AlCl3可導(dǎo)致大鼠認(rèn)知功能障礙，鋁神經(jīng)毒性損傷大鼠模型建立成功。HP干預(yù)后，Morr

6、is水迷宮試驗(yàn)顯示，Al+HP組到達(dá)平臺(tái)時(shí)間顯著低于Al組(p＜0.05)，目標(biāo)象限滯留時(shí)間和穿越平臺(tái)位置次數(shù)量顯著高于Al組;曠場(chǎng)探索試驗(yàn)顯示，Al+HP組穿越方格個(gè)數(shù)和站立次數(shù)均顯著高于Al組(p＜0.05)，表明HP可有效緩解AlCl3所致大鼠神經(jīng)毒性損傷。
　　(2)體重、腦體系數(shù)和海馬鋁含量檢測(cè)顯示，各組間大鼠體重和腦體系數(shù)無顯著差異(p＞0.05);Al組海馬鋁含量顯著高于C組(p＜0.01)，Al+HP組海馬鋁含量低

7、于Al組(p＜0.05)，表明HP可降低鋁暴露大鼠海馬鋁含量。
　　(3)氧化應(yīng)激標(biāo)志物檢測(cè)顯示，Al組大鼠海馬腦區(qū)中ROS、羰基、8-OHdG和MDA含量顯著高于C組(p＜0.01)，GSH含量和SOD活性顯著低于C組(p＜0.01);而Al+HP組ROS、羰基、8-OHdG和MDA含量顯著低于Al組(p＜0.05)，GSH含量和SOD活性顯著高于Al組(p＜0.05)，表明HP可緩解AlCl3致大鼠海馬腦區(qū)氧化損傷。
　

8、　透射電鏡觀察顯示，C組海馬腦區(qū)神經(jīng)細(xì)胞胞質(zhì)均勻，核膜完整，核質(zhì)均勻，線粒體數(shù)量較多，線粒體膜結(jié)構(gòu)完整，線粒體脊結(jié)構(gòu)清晰;Al組海馬腦區(qū)神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)核膜不完整，核質(zhì)溶解，線粒體膨脹，脊結(jié)構(gòu)模糊不清，甚至出現(xiàn)空泡化現(xiàn)象;Al+HP組和HP與C組相似，無顯著病理變化，表明HP可緩解AlCl3致大鼠海馬腦區(qū)超微結(jié)構(gòu)損傷。
　　Nrf2信號(hào)檢測(cè)顯示，Al組和Al+HP組Nrf2核蛋白和總蛋白表達(dá)均顯著高于C組(p＜0.05)，OH-1 m

9、RNA、GCLC mRNA和NQO1 mRNA表達(dá)均顯著高于C組(p＜0.05);而Al+HP組Nrf2核蛋白和總蛋白表達(dá)均顯著高于Al組(p＜0.01)，OH-1 mRNA、GCLC mRNA和NQO1 mRNA表達(dá)均顯著高于Al組(p＜0.01)，表明HP可激活Nrf2信號(hào)緩解AlCl3致海馬腦區(qū)氧化應(yīng)激。
　　(4)膠質(zhì)細(xì)胞激活標(biāo)志物和促炎性因子檢測(cè)顯示，Al組MHCⅡ和GFAP蛋白表達(dá)以及IL-6和TNF-α含量均顯著高于

10、C組(p＜0.01)，Al+HP組MHCⅡ和GFAP蛋白表達(dá)以及IL-6和TNF-α含量均顯著低于Al組(p＜0.01)，表明HP可緩解AlCl3致大鼠海馬腦區(qū)炎性反應(yīng)。
　　NF-κB信號(hào)檢測(cè)顯示，Al組NF-κB核蛋白和總蛋白表達(dá)以及IL-6和TNF-α mRNA表達(dá)均顯著高于C組(p＜0.01)，Al+HP組NF-κB核蛋白和總蛋白表達(dá)以及IL-6和TNF-αmRNA表達(dá)均低于Al組(p＜0.05)，表明HP可抑制NF-κB

11、信號(hào)緩解AlCl3致海馬腦區(qū)炎癥反應(yīng)
　　(5) Aβ42含量檢測(cè)顯示，Al組海馬腦區(qū)Aβ42含量顯著高于C組(p＜0.01)，而Al+HP組海馬腦區(qū)Aβ42含量顯著高于C組(p＜0.01)。另外，剛果紅染色觀測(cè)顯示，Al組海馬腦區(qū)可見大量紅色淀粉樣斑塊，而HP+Al組紅色淀粉樣斑塊極少，表明HP可緩解AlCl3致大鼠海馬腦區(qū)Aβ生成增多。
　　APP及其相關(guān)水解酶檢測(cè)顯示，Al組海馬腦區(qū)APP，BACE1，PS1和PS2

12、mRNA表達(dá)顯著高于C組(p＜0.01)，ADAM9、ADAM10和ADAM17 mRNA表達(dá)顯著低于C組(p＜0.01);而Al+HP組海馬腦區(qū)APP、BACE1、PS1和PS2 mRNA表達(dá)低于Al組(p＜0.01)，Al+HP組ADAM9、ADAM10和ADAM17 mRNA表達(dá)高于Al組(p＜0.05)，表明HP可抑制APP mRNA表達(dá)并改變其水解途徑緩解AlCl3致大鼠海馬Aβ生成增加。
　　(6)樹突棘密度檢測(cè)顯示，

13、Al組DG區(qū)、CAl區(qū)以及CA3區(qū)低于C組(p＜0.05)，Al+HP組DG區(qū)、CA1區(qū)以及CA3區(qū)高于Al組(p＜0.05)，表明HP緩解AlCl3所致的大鼠海馬腦區(qū)樹突棘密度降低。
　　BDNF蛋白表達(dá)和F-actin/G-actin蛋白比率檢測(cè)顯示，Al組BDNF蛋白表達(dá)和F-actin/G-actin蛋白比率顯著低于C組(p＜0.01);而Al+HP組BDNF蛋白表達(dá)和F-actin/G-actin蛋白比率高于Al組(p＜