2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、黃孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)是一株典型的白腐真菌,該菌株不僅具有非特異性的降解能力,而且能夠產(chǎn)生具有抗逆性的厚垣孢子。真菌一旦形成了厚垣孢子,就可以有較長的貨架期。本文描述了一種P.chrysosporium厚垣孢子工業(yè)化生產(chǎn)的發(fā)酵工藝。同時,探究其形成機制,以期指導(dǎo)生產(chǎn)。
  本研究主要內(nèi)容包括:⑴介紹采用發(fā)酵工藝中補料分批培養(yǎng)形式,通過對厚垣孢子誘導(dǎo)培養(yǎng)基(補料)營養(yǎng)成分和發(fā)酵條件的

2、單因素實驗,得到了適用于工業(yè)發(fā)酵P.chrysosporium產(chǎn)厚垣孢子的生產(chǎn)工藝。優(yōu)化后的補料配方是誘導(dǎo)劑-a3.8 g/L,七水合硫酸鎂2.5 g/L,硫酸氨含量為3.0 g/L,葡萄糖含量為30.0 g/L、苯甲醇0.50 mL/L、磷酸二氫鉀2.0 g/L、氯化鈣0.50g/L、吐溫800.50 mL/L、維生素B10.001 g/L、微量元素液70.0 mL/L。最佳培養(yǎng)條件是:將100 mL、pH4.5的四倍濃縮補料接入已培

3、養(yǎng)48 h菌絲的培養(yǎng)基中,在35℃、160 r/min條件下振蕩培養(yǎng)3d,菌絲球干重及孢子數(shù)量分別是3.97 g/L、2.687×109個/L。⑵將上述優(yōu)化的條件,應(yīng)用于50 L發(fā)酵罐,最優(yōu)的生產(chǎn)條件是將菌絲培養(yǎng)36h后補料,補料后60 h放罐,收獲厚垣孢子。與搖瓶相比,整個發(fā)酵周期縮短了24 h,厚垣孢子數(shù)量為5.710×109個/L,最終得到300.0 g產(chǎn)品,還原糖僅剩0.18 g/L。利用濕室載片培養(yǎng)技術(shù)測產(chǎn)品的萌發(fā)率為72%。

4、⑶通過對固體培養(yǎng)基及接種時菌的狀態(tài)的篩選比較,采用等比例秸稈麥麩培養(yǎng)基,接種1.0 g菌絲球發(fā)酵一周可產(chǎn)生大量厚壁的大孢子細胞,形成的菌墊約厚2.5 mm,與空氣接觸面較光滑且形成少量分生孢子,余1.336 g秸稈麩皮,利用率達86.64%。該大孢子細胞的特征是細胞壁普遍較液體發(fā)酵的厚垣孢子厚,且直徑較大,測得的最大直徑約70μm,在直徑為40μm的大孢子中,細胞壁厚約6.7μm。⑷應(yīng)用熒光染色技術(shù)測厚垣孢子成分。細胞壁由薄外壁及厚內(nèi)壁

5、組成,增厚部分由含β-1,4-糖苷鍵的多糖組成。細胞內(nèi)含大量的中性脂肪酸。在纖維素酶解實驗中,20 mg等量的菌絲和厚垣孢子細胞壁經(jīng)酶解,測得的終產(chǎn)物濃度分別為0.244g/L和0.215g/L,即纖維素不是厚垣孢子增厚細胞壁的主要成分;在β-葡聚糖酶解實驗中,20 mg等量的菌絲和厚垣孢子細胞壁經(jīng)酶解,測得的終產(chǎn)物濃度分別為0.480g/L和0.598g/L,即厚垣孢子葡聚糖含量較高;在幾丁質(zhì)酶解實驗中,5 mg等量的菌絲和厚垣孢子細

6、胞壁經(jīng)酶解,測得的終產(chǎn)物濃度分別為0.313 g/L和0.290 g/L,即兩者含量無明顯差異。⑸鎖定三條主要的顯著富集的代謝通路-淀粉和蔗糖代謝通路、MAPK代謝通路及脂肪酸降解通路,并推導(dǎo)出P.chrysosporium的葡聚糖合成路徑、脂肪酸代謝路徑及MAPK調(diào)控路徑,推測厚垣孢子增厚的細胞壁成分可能與葡聚糖有關(guān),細胞內(nèi)合成同時積累脂肪酸,為維持正常生長提供能量。選取六個相關(guān)的基因進行qRT-PCR驗證,從整體上看此次轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)

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