木霉菌產(chǎn)生厚垣孢子相關(guān)基因的篩選與克隆.pdf

1、木霉菌是一種具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的絲狀真菌，是一類分布廣泛的土壤習(xí)居菌，被認(rèn)為是最有希望的生防因子。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在全世界25個(gè)國(guó)家和美國(guó)43個(gè)州的生物防治課題中，大約34％是有關(guān)木霉的研究，可見木霉菌在生物防治上具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)和研究?jī)r(jià)值。它的特點(diǎn)是對(duì)于生長(zhǎng)環(huán)境具有廣泛的適應(yīng)性，可利用各種簡(jiǎn)單或復(fù)雜的碳源和氮源，木霉可產(chǎn)生多樣的拮抗作用，產(chǎn)生抗生物質(zhì)和溶菌酶類。目前利用木霉作為植物病害的生防真菌已有很多的報(bào)道，但將木霉作為生物農(nóng)藥直接用于生產(chǎn)，菌劑

2、的保質(zhì)期還存在一定的問(wèn)題。生物制劑要求有一定的保質(zhì)期，而影響菌劑保質(zhì)期的主要因素是菌體類型。木霉制劑有兩種類型，一種利用分生孢子另一種利用厚垣孢子。分生孢子產(chǎn)量大，但存活期短，而厚垣孢子存活時(shí)間長(zhǎng)，保質(zhì)期長(zhǎng)，因此厚垣孢子制劑有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。目前對(duì)于厚垣孢子的研究多在于孢子的培養(yǎng)條件，對(duì)于厚垣孢子形成的分子機(jī)制還知之甚少。為了研究這一問(wèn)題，我們利用RNA指紋技術(shù)cDNA-AFLP(cDNA-amplifiedfragmentlengthp

3、olymophism)分析了綠色木霉在特異產(chǎn)厚垣孢子的培養(yǎng)基中產(chǎn)生厚垣孢子和不產(chǎn)生厚垣孢子時(shí)基因表達(dá)的差異。采用了96對(duì)引物組合，分離到48個(gè)有差異的cDNA片段。通過(guò)ReverseNorthernBlot進(jìn)一步篩選出了五個(gè)陽(yáng)性克隆。NorthernBlot結(jié)果顯示，其中五個(gè)片段(TriⅠ、TriⅡ、TriⅢ、TriⅣ、TriⅤ)都呈陽(yáng)性反應(yīng)，TriⅠ和TriⅡ在不產(chǎn)生厚垣孢子的時(shí)候表達(dá)量很少，但在產(chǎn)生厚垣孢子時(shí)表達(dá)量明顯增加。TriⅢ