脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)大鼠心肌缺血再灌注后炎癥反應(yīng)及心臟功能的影響.pdf

1、目的:本課題擬將脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(ADSCs)移植于大鼠心肌梗死后缺血再灌注(MI/R)模型中，比較其對(duì)炎癥反應(yīng)和心臟功能的影響及機(jī)制，尋找到心肌缺血再灌注損傷及心室重構(gòu)防治的新靶點(diǎn)，為干細(xì)胞應(yīng)用于心梗后心力衰竭的防治提供有力的實(shí)驗(yàn)依據(jù)及新的研究思路。
　　方法:1)建立大鼠MI/R模型，血液分析儀檢測(cè)血中中性粒細(xì)胞隨時(shí)間變化情況，HE染色、免疫熒光染色及流式細(xì)胞學(xué)分析心臟中中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞隨時(shí)間浸潤(rùn)情況，同時(shí)確定ADSCs的

2、移植時(shí)機(jī);2)體外分離、培養(yǎng)、鑒定大鼠ADSCs，不同時(shí)機(jī)靜脈注射到MI/R模型，28d后超聲心動(dòng)圖及血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)FS、EF、+dp/dtmax、-dp/dtmin等心臟功能指標(biāo)，48h后TTC/Evans blue染色觀察心梗面積，HE染色、免疫熒光染色及流式細(xì)胞學(xué)分析心臟中中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞隨時(shí)間浸潤(rùn)情況以及中性粒細(xì)胞CD11b、巨噬細(xì)胞CD163表達(dá)情況;3)48h后流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)心臟中巨噬細(xì)胞CD163表達(dá)情況及其對(duì)中性粒細(xì)

3、胞的吞噬。體外分離培養(yǎng)鑒定巨噬細(xì)胞及中性粒細(xì)胞，CFSE標(biāo)記中性粒細(xì)胞，流式細(xì)胞學(xué)分析中性粒細(xì)胞24h凋亡情況;將巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞與ADSCs共培養(yǎng)，免疫熒光染色和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)巨噬細(xì)胞CD163表達(dá)及其對(duì)中性粒細(xì)胞的吞噬情況。
　　結(jié)果:1)血中中性粒細(xì)胞數(shù)量隨時(shí)間動(dòng)態(tài)變化，與假手術(shù)組相比，MI/R組中性粒細(xì)胞數(shù)量在12h后仍持續(xù)上升，同時(shí)心臟中大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，在24h左右達(dá)到頂峰;2)與MI/R相比，ADSCs移植組2

4、8d后FS、EF、+dp/dtmax、-dp/dtmin等顯著升高，48h后心梗區(qū)面積、心梗區(qū)與危險(xiǎn)區(qū)的比值顯著減小，其中再灌注時(shí)移植的效果優(yōu)于24h后移植。24h后與MI/R組相比，再灌注時(shí)ADSCs移植組心臟中中性粒細(xì)胞比例顯著減少，而中性粒細(xì)胞CD11b表達(dá)顯著升高;72h后與MI/R組相比，24h-ADSCs移植組心臟中白細(xì)胞及中性粒細(xì)胞比例顯著減少，而巨噬細(xì)胞比例及CD163陽(yáng)性巨噬細(xì)胞所占比例明顯上升;3)48h后與MI/R

5、組相比，24h-ADSCs移植組中性粒細(xì)胞CD163陽(yáng)性率明顯升高。在體外，與ADSCs共培養(yǎng)24h后的巨噬細(xì)胞CD163陽(yáng)性率明顯增高;加入早期凋亡的中性粒細(xì)胞后，與ADSCs共培養(yǎng)24h后的巨噬細(xì)胞CFSE陽(yáng)性率明顯增高，CFSE+CD163+的細(xì)胞明顯增加。
　　結(jié)論:1)MI/R早期炎癥反應(yīng)以中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)為主，其數(shù)量隨時(shí)間動(dòng)態(tài)變化，在24h達(dá)到頂峰，即炎癥在24h開(kāi)始消退;2)ADSCs移植能夠減輕缺血再灌注損傷，減少梗