腦脈通聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)腦缺血再灌注大鼠腦微血管再生的影響.pdf

1、目的：從腦缺血再灌注損傷后不同時(shí)間點(diǎn)大鼠神經(jīng)功能、腦組織含水量、腦梗死面積、腦組織病理改變和腦微血管再生方面，評(píng)價(jià)腦脈通、骨髓MSCs移植及其聯(lián)合應(yīng)用對(duì)腦缺血損傷的保護(hù)作用，并進(jìn)一步從VEGF、VEGFR-2、bFGF表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化方面，揭示其促微血管再生的作用機(jī)制。 方法：SD大鼠，195只，3～4月齡。第一次根據(jù)處理因素隨機(jī)分為假手術(shù)組和手術(shù)組，手術(shù)組包括模型組、腦脈通組、MSCs移植組(簡(jiǎn)稱移植組)、腦脈通聯(lián)合MSCs移植

2、組(簡(jiǎn)稱聯(lián)合組)；第二次對(duì)手術(shù)組根據(jù)取材時(shí)間點(diǎn)不同隨機(jī)分為7d、14d、28d組。腦脈通組和聯(lián)合組術(shù)前4天給予腦脈通灌胃，假手術(shù)組、模型組和移植組以同等體積的生理鹽水灌胃，每天1次。參照改良的Longa法線栓阻塞大腦中動(dòng)脈制備局灶性腦缺血再灌注動(dòng)物模型。移植組和聯(lián)合組分別于缺血3h再灌注后24h經(jīng)缺血側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈給予Brdu標(biāo)記的MSCs懸浮液200ul(細(xì)胞數(shù)為2×10<'6>個(gè))，模型組和腦脈通組給予同等體積的生理鹽水。大鼠在各取材時(shí)

3、間點(diǎn)進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，檢測(cè)腦組織含水量、腦梗死面積；光鏡下觀察缺血區(qū)病理變化，電鏡技術(shù)觀察神經(jīng)元、微血管及EC的變化。采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)腦組織中CD31<'+>細(xì)胞、VEGF、VEGFR-2、bFGF表達(dá)的變化；免疫組化雙標(biāo)法觀察Brdu/FⅧ雙標(biāo)細(xì)胞數(shù)量與FⅧ(血管內(nèi)皮細(xì)胞)分化率。 結(jié)果：①各組神經(jīng)功能評(píng)分、腦組織含水量、梗塞面積及腦組織病理變化：模型組7d、14d、28d較假手術(shù)組神經(jīng)評(píng)分降低、腦組織含水量增加、腦

4、梗塞面積增大；腦脈通和聯(lián)合組7d、14d、28d分別較模型組神經(jīng)評(píng)分增高、腦組織含水量降低、梗塞面積減小，移植組28d較模型組神經(jīng)評(píng)分增高、腦組織含水量降低；聯(lián)合組28d分別較腦脈通和移植組神經(jīng)評(píng)分增高、腦組織含水量降低，聯(lián)合組7d和14d腦組織含水量較移植組降低，聯(lián)合組7d和28d梗塞面積較移植組減小；移植組7d較腦脈通組神經(jīng)評(píng)分降低、腦組織含水量增加、腦梗塞面積增大。手術(shù)組出現(xiàn)不同程度的病理?yè)p傷、毛細(xì)血管增多和EC超微結(jié)構(gòu)改變。②腦

5、組織Brdu/FⅧ雙標(biāo)細(xì)胞數(shù)量與FⅧ(血管內(nèi)皮細(xì)胞)分化率的變化：聯(lián)合組14d Brdu標(biāo)記細(xì)胞的數(shù)量明顯多于移植組；聯(lián)合組7d較移植組Brdu/FⅧ標(biāo)細(xì)胞增多、Brdu標(biāo)記細(xì)胞分化為EC的比率增高。⑧各組大鼠腦組織內(nèi)CD31<'+>細(xì)胞表達(dá)的變化：模型組7d、14d、28d較假手術(shù)組表達(dá)增強(qiáng)；腦脈通、移植和聯(lián)合組7d、14d、28d分別較模型組表達(dá)增強(qiáng)；聯(lián)合組7d較移植組顯著增強(qiáng)，聯(lián)合組28d較腦脈通組增強(qiáng)；腦脈通組7d較移植組顯著增

6、強(qiáng)。④各組大鼠腦組織內(nèi)VEGF、VEGFR-2、bFGF表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化：模型組7d、14d、28d VEGF表達(dá)較假手術(shù)組增強(qiáng)；腦脈通組7d和14d較模型組增強(qiáng)，移植組14d較模型組增強(qiáng)，聯(lián)合組7d和28d較模型組增強(qiáng)；聯(lián)合組7d和28d較移植組增強(qiáng)，聯(lián)合組28d較腦脈通組增強(qiáng)；腦脈通組7d較移植組顯著增強(qiáng)。模型組7d、14d、28d VEGFR2表達(dá)較假手術(shù)組增強(qiáng)；聯(lián)合組7d、14d、28d較模型組增強(qiáng)，腦脈通組7d和28d較模型組增

7、強(qiáng)，移植組28d較模型組增強(qiáng)；聯(lián)合組28d較腦脈通組增強(qiáng)，聯(lián)合組7d和14d較移植組增強(qiáng)；腦脈通組7d較移植組顯著增強(qiáng)。模型組7d和14d bFGF表達(dá)較假手術(shù)組增強(qiáng)；腦脈通和聯(lián)合組7d、14d、28d分別較模型組增強(qiáng)，移植組14d和28d較模型組增強(qiáng)：聯(lián)合組7d較移植組增強(qiáng)，聯(lián)合組28d較腦脈通組增強(qiáng)；移植組7d較腦脈通組顯著降低，移植組14d和28d較腦脈通組增強(qiáng)。 結(jié)論：①腦脈通、MSCs移植及其聯(lián)合應(yīng)用有明顯的抗腦缺血損