腦脈通聯(lián)合骨髓干細(xì)胞動員劑對腦缺血損傷后微血管再生的影響.pdf

1、腦血管疾病是一種高致殘、高復(fù)發(fā)的常見病，嚴(yán)重危害老年人的生命健康和生存質(zhì)量，我國腦血管病居三大死亡原因(腦血管病、心臟病、癌癥)首位，其中缺血性腦血管病占60％～80％，加強(qiáng)缺血性腦血管病的防治研究甚為迫切。因此，本課題以大鼠為研究對象，研究腦脈通聯(lián)合骨髓干細(xì)胞動員對腦缺血損傷的保護(hù)作用及血管再生的影響，從其對血管再生相關(guān)因子變化的影響方面，探討腦脈通聯(lián)合骨髓干細(xì)胞動員對腦缺血損傷后微血管再生的可能機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。 目

2、的：1.從腦缺血后不同時間點大鼠的體重下降率、神經(jīng)功能、腦組織含水量、腦梗死面積、腦組織病理改變觀察大鼠腦缺血損傷后腦組織損傷及微血管再生的特點，揭示其變化規(guī)律。2.從外周血白細(xì)胞計數(shù)、外周血CD34+細(xì)胞數(shù)量以及腦組織CD34+表達(dá)等方面，觀察粒細(xì)胞集落刺激因子(Granulocyte Colony-stimulatingFactor，G-CSF)、腦脈通及其聯(lián)合應(yīng)用對骨髓干細(xì)胞動員和歸巢的影響；3.從腦組織Ⅷ因子表達(dá)、血管內(nèi)皮細(xì)胞生

3、長因子(Vascular Endothelial cell Growth Factor，VEGF)表達(dá)和堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic Fibroblast Growth Factor，bFGF)表達(dá)等方面的動態(tài)變化，觀察大鼠腦缺血損傷后腦組織損傷及微血管再生的特點，揭示其變化規(guī)律；通過腦脈通、BMSCs動員及其聯(lián)合應(yīng)用對上述變化的影響，評價其對大鼠腦缺血損傷的保護(hù)作用及其對腦缺血損傷后微血管再生的促進(jìn)作用，并初步揭示其可能的作用機(jī)

4、制。 方法：采用SD大鼠，202只，雌雄各半，按隨機(jī)數(shù)字表法進(jìn)行分組：假手術(shù)組、模型組、骨髓干細(xì)胞動員組(簡稱動員組)、腦脈通組、腦脈通聯(lián)合骨髓干細(xì)胞動員組(簡稱聯(lián)合組)，其中假手術(shù)組為10只大鼠，其余各組均為48只(各組根據(jù)取材時間點又隨機(jī)分為2d、3d、7d、14d組，每組各12只)。假手術(shù)組和模型組于造模手術(shù)前4天開始給予生理鹽水(1ml/100g/d)灌胃，動員組給予同等體積的生理鹽水灌胃，腦脈通組和聯(lián)合組給予同等體積的

5、腦脈通(40.5mg/100g/d，40.5mg/ml)灌胃；術(shù)前3天和術(shù)后2天假手術(shù)組、模型組和腦脈通組給予皮下注射生理鹽水(1ml/100g/d)，動員組和聯(lián)合組給予皮下注射重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)注射液(1μg/100g/d，1μg/0.1ml)。參照改良的Longa法用栓線阻塞大鼠大腦中動脈制備局灶性腦缺血動物模型(MCAO)。術(shù)后相應(yīng)時間點觀察各組大鼠體重下降率、神經(jīng)功能評分、腦組織含水量、腦組織梗死面積、腦

6、組織病理改變、檢測外周血白細(xì)胞及CD34+細(xì)胞計數(shù)、免疫組織化學(xué)方法檢測腦組織中CD34+表達(dá)、Ⅷ因子、VEGF、bFGF表達(dá)。 結(jié)果：1.模型2d、3d組大鼠外周血WBC較假手術(shù)組顯著升高(p<0.01)；動員及聯(lián)合各組大鼠外周血WBC較模型組顯著升高(p<0.05，p<0.01)，以聯(lián)合3d組尤為顯著(p<0.01)；動員各組較腦脈通組明顯增高(p<0.05，p<0.01)；聯(lián)合各組較腦脈通組均明顯增高(p<0.01)，聯(lián)合

7、組2d、3d組較動員組均明顯增高(p<0.01)。各組大鼠外周血WBC 2d至3d呈上升趨勢，7d較3d降低，7d至14d呈下降趨勢，但動員組7d和聯(lián)合組7d組大鼠外周血WBC仍維持較高水平，以聯(lián)合7d組為更高。2.假手術(shù)組外周血中有少量CD34+細(xì)胞。模型2d、3d組大鼠外周血CD34+細(xì)胞計數(shù)較假手術(shù)組顯著升高(p<0.05，p<0.01)。動員及聯(lián)合2d組、3d組大鼠外周血CD34+細(xì)胞計數(shù)較模型組顯著升高(p<0.05，p<0.

8、01)，以3d組尤為顯著(p<0.01)；動員各組較腦脈通組明顯增高(p<0.01)；聯(lián)合各組較腦脈通組均明顯增高(p<0.01)，聯(lián)合3d、7d組較動員組顯著升高(p<0.01)。各組大鼠外周血CD34+細(xì)胞2d至3d呈上升趨勢，7d較3d降低，7d至14d呈下降趨勢，但動員組7d和聯(lián)合組7d組大鼠外周血CD34+細(xì)胞仍維持較高水平，以聯(lián)合7d組為更高。假手術(shù)組腦組織中沒檢測到CD34+表達(dá)。模型組大鼠腦組織CD34+表達(dá)較假手術(shù)組均

9、顯著升高(p<0.01)；腦脈通和動員及聯(lián)合各組CD34+表達(dá)較模型組均顯著升高(p<0.05，p<0.01)，以聯(lián)合7d組尤為顯著(p<0.01)；動員各組較腦脈通組均顯著升高(p<0.01)；與聯(lián)合組相比，腦脈通各組和動員3d、7d、14d組CD34+表達(dá)均顯著降低(p<0.05，p<0.01)，腦脈通各各組的差異尤為顯著(p<0.01)。各組大鼠腦組織中CD34+表達(dá)2d至7d呈上升趨勢，14d較7d降低，但動員組14d和聯(lián)合組1

10、4d大鼠外周血CD34+細(xì)胞仍維持較高水平，以聯(lián)合14d組為更高。3.假手術(shù)組大鼠2d，3d，7d無明顯下降，14d增加明顯；模型組大鼠2d，3d，7d體重下降率較假手術(shù)組顯著增加，14d體重增幅較小，各時間點神經(jīng)功能評分顯著降低，腦組織含水量顯著上升，腦梗塞面積顯著增大，腦組織病理觀察假手術(shù)組未見明顯病理損傷；模型及治療組大鼠腦組織可見不同程度的病理損傷和微血管破壞；腦脈通、動員及聯(lián)合各組較模型組大鼠2d、3d、7d體重下降率顯著減少

11、，神經(jīng)功能評分顯著增高，腦組織含水量顯著降低，腦梗塞面積顯著減小，腦組織病理損傷和微血管破壞減輕，聯(lián)合各組改善更為顯著，聯(lián)合14d組尤為明顯；與腦脈通組和動員組比較，聯(lián)合7d組微血管超微結(jié)構(gòu)改善明顯，僅見毛細(xì)血管周圍輕度水腫，吞飲泡減少，微絨毛減少，線粒體水腫減輕，基底膜僅有輕度缺損，局部水腫，到14d血管超微結(jié)構(gòu)恢復(fù)接近正常。4．假手術(shù)組有少量Ⅷ因子陽性表達(dá)。模型各組Ⅷ因子陽性表達(dá)較假手術(shù)組顯著升高(P<0.01)；動員各組，腦脈通3

12、d、7d、14d組，聯(lián)合各組較模型組均顯著升高(P<0.05，P<0.01)；動員3d組較腦脈通組有顯著差異(P<0.05)；聯(lián)合各組較腦脈通組和動員組均具有顯著差異(P<0.05，P<0.01)。各組大鼠Ⅷ因子陽性表達(dá)2d至14d呈上升趨勢，聯(lián)合組14d大鼠Ⅷ因子陽性表達(dá)為最高，且以聯(lián)合7d組已顯示較高水平。5.假手術(shù)組有少量VEGF和bFGF陽性表達(dá)。模型各組VEGF組已顯示較高水平。5.假手術(shù)組有少量VEGF和bFGF陽性表達(dá)。模

13、型各組VEGF和bFGF陽性表達(dá)較假手術(shù)組均顯著升高(P<0.01)；與模型組比較，腦脈通、動員各及聯(lián)合各組大鼠VEGF陽性表達(dá)均顯著升高(P<0.05，P<0.01)，腦脈通3d、7d、14d組，動員各組和聯(lián)合各組大鼠bFGF陽性表達(dá)均顯著升高(P<0.05，P<0.01)；動員3d、7d、14d組大鼠VEGF陽性表達(dá)較腦脈通組均具有顯著差異(P<0.05，P<0.01)；聯(lián)合組大鼠VEGF陽性表達(dá)較腦脈通各組和動員3d、7d、14d

14、組均具有顯著差異(P<0.05，P<0.01)，聯(lián)合各組大鼠bFGF陽性表達(dá)較腦脈通組和動員組均具有顯著差異(P<0.05，P<0.01)。模型各組和動員各組大鼠VEGF表達(dá)2d至3d呈上升趨勢，7d較3d降低，7d至14d呈下降趨勢，但動員7d組VEGF仍維持較高水平，腦脈通各組和聯(lián)合各組大鼠VEGF表達(dá)2d至7d呈上升趨勢，以聯(lián)合7d組為更高，14d較7d降低，但聯(lián)合14d組VEGF仍維持較高水平；各組大鼠bFGF表達(dá)2d至14d呈

15、上升趨勢，以聯(lián)合各組上升更明顯。 結(jié)論：1.腦缺血可造成大鼠腦組織的病理損傷明顯；腦脈通、BMSCs動員劑及其聯(lián)合應(yīng)用可以改善大鼠神經(jīng)功能，減輕腦水腫，減小腦梗死灶，對腦損傷有明顯的保護(hù)作用，并隨著時間的延長呈增強(qiáng)趨勢；腦脈通在腦損傷早期即顯示明顯的腦保護(hù)作用，并隨著時間的延長而增強(qiáng)；動員劑早期未顯示明顯的腦保護(hù)作用，隨著時間的延長其作用逐漸增強(qiáng)；腦脈通聯(lián)合BMSCs動員劑可使用藥腦保護(hù)提前，并使用藥后期腦保護(hù)作用增強(qiáng)。2.應(yīng)用

16、BMSCs動員劑，早期大鼠外周血WBC和CD34+細(xì)胞計數(shù)及腦組織CD34’表達(dá)顯著升高，后期呈下降趨勢；腦脈通可以增強(qiáng)動員劑早期對外周血WBC和CD34+細(xì)胞計數(shù)及腦組織CD34+表達(dá)的升高趨勢，并延緩其后期的下降趨勢；腦脈通可增強(qiáng)動員劑對BMSCs的動員作用，并促進(jìn)BMSCs的歸巢。3.腦脈通、BMSCs動員及其聯(lián)合應(yīng)用均可促進(jìn)腦缺血區(qū)Ⅷ因子表達(dá)，其中以聯(lián)合組14d的作用較單獨用藥尤為明顯，提示腦脈通、BMSCs動員劑及聯(lián)合應(yīng)用均可