血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑對(duì)骨髓干細(xì)胞心肌再生影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的探討血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑卡托普利(Captopril，Cap)和依那普利(Enalapril，Ena)對(duì)骨髓干細(xì)胞心肌再生的影響，以期為臨床干細(xì)胞移植治療心梗提供依據(jù)。方法1)體外模擬心肌微環(huán)境，誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymalstemcells，MSCs)向心肌細(xì)胞分化。取SD大鼠股骨、脛骨的骨髓液，加入培養(yǎng)基接種培養(yǎng)，通過(guò)換液與傳代逐漸純化擴(kuò)增MSCs后，取第4代MSCs。同時(shí)酶消化法分離乳鼠的心肌細(xì)胞，3天后用D

2、API標(biāo)記的P4MSCs與心肌細(xì)胞按1∶2比例共培養(yǎng)。在共培養(yǎng)的第1d至第5d用免疫熒光技術(shù)分別檢測(cè)心肌特異性肌節(jié)肌球蛋白重鏈(MHC)、肌鈣蛋白T(TnT)的表達(dá)，統(tǒng)計(jì)既有胞漿發(fā)出紅色熒光又有胞核發(fā)出藍(lán)色熒光的細(xì)胞數(shù)量(即表達(dá)TnT或MHC的MSCs的數(shù)量)及所有胞核發(fā)藍(lán)色熒光的細(xì)胞數(shù)量(即DAPI-MSCs的數(shù)量)，兩者相比即為向心肌樣細(xì)胞分化的DAPI-MSCs百分率。2)在體外模擬心肌微環(huán)境下，Cap和Ena對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向

3、心肌樣細(xì)胞分化的影響。用DAPI(25μg/ml)標(biāo)記第4代MSCs。取培養(yǎng)第3天的心肌細(xì)胞與第4代DAPI-MSCs按2∶1比例混合培養(yǎng)，并隨機(jī)分成三組，第一組加入10μMCap，第二組加入10μMEna，第三組為空白對(duì)照組。用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)心肌特異性肌球蛋白重鏈(MHC)、肌鈣蛋白T(TnT)的表達(dá)。每孔隨機(jī)取10個(gè)視野，計(jì)數(shù)陽(yáng)性表達(dá)MHC或TnT的DAPI-MSCs的數(shù)量，統(tǒng)計(jì)向心肌樣細(xì)胞分化的DAPI-MSCs百分率。3)Ca

4、p和Ena對(duì)骨髓干細(xì)胞在體動(dòng)員向心肌細(xì)胞分化的影響：雄性SD大鼠64只，隨機(jī)分為4組：AMI組(心肌梗死組)、G-CSF組(心肌梗死動(dòng)員組)、Cap組(Cap干預(yù)心肌梗死動(dòng)員組)及Ena組(Ena干預(yù)心肌梗死組)，每組16只。用異丙腎上腺素制作大鼠心肌壞死模型，以粒細(xì)胞集落刺激因子(G-SCF)在體動(dòng)員大鼠骨髓干細(xì)胞釋放和遷移至心肌壞死灶。于造模后24h、3周殺死大鼠，取出心臟組織，通過(guò)電鏡、免疫組化和HE染色方法觀察大鼠心肌壞死灶的C

5、D34+細(xì)胞浸潤(rùn)、心肌超微結(jié)構(gòu)、血管新生及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的情況。結(jié)果1)骨髓細(xì)胞通過(guò)換液與傳代，第4代骨髓干細(xì)胞為純度較高的MSCs，以DAPI標(biāo)記其胞核標(biāo)記率可達(dá)到為100％。共培養(yǎng)后，MSCs于共培養(yǎng)的第1天就開(kāi)始表達(dá)心肌特異性蛋白MHC，但陽(yáng)性表達(dá)率低；到第5天，MHC陽(yáng)性的MSCs達(dá)3.71％；DAPI-MSCs于第4天出現(xiàn)TnT的陽(yáng)性表達(dá)，第5天TnT陽(yáng)性的MSCs達(dá)1.45％。2)應(yīng)用Cap和Ena干預(yù)后，于共培養(yǎng)的第5天

6、，Cap組DAPI-MSCs出現(xiàn)MHC的陽(yáng)性表達(dá)率為3.68％，TnT陽(yáng)性的MSCs達(dá)1.43％；Ena組DAPI-MSCs的MHC的陽(yáng)性表達(dá)率為3.77％，TnT陽(yáng)性的MSCs達(dá)1.48％，與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異(P＞0.05)。3)造模后24h，各動(dòng)員組大鼠心肌梗死區(qū)可見(jiàn)CD34+細(xì)胞浸潤(rùn)，Cap和Ena干預(yù)組的CD34+細(xì)胞數(shù)和VEGF的陽(yáng)性表達(dá)均高于AMI組和G-CSF組(P＜0.05)；造模后3周，各動(dòng)員組大鼠心肌微血管數(shù)和V