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1、本研究分為二部分: 第一部分:5-BrdU標(biāo)記的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)大鼠創(chuàng)面愈合的作用研究 目的:探討經(jīng)5-溴脫氧尿嘧啶(5-BrdU)標(biāo)記的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)在大鼠創(chuàng)面愈合中的作用。為研究創(chuàng)傷愈合的機(jī)制和治療方法提供新的思路。 方法:分離培養(yǎng)大鼠BMSCs并用流式細(xì)胞儀技術(shù)鑒定。將大鼠背部脊柱一側(cè)作為實(shí)驗(yàn)組并制作一全層皮膚缺損模型,其對(duì)側(cè)為對(duì)照組,經(jīng)尾靜脈注入經(jīng)5-BrdU標(biāo)記的BMSCs,移植細(xì)胞數(shù)
2、為2×107。術(shù)后3d、7d、14d、21d、28d分批處死動(dòng)物,觀察移植細(xì)胞參與創(chuàng)面愈合的情況。 結(jié)果:流式細(xì)胞儀鑒定細(xì)胞表達(dá)CD29、CD90表達(dá)陽性;CD45表達(dá)呈陰性。實(shí)驗(yàn)組:經(jīng)5-BrdU體外標(biāo)記的BMSCs進(jìn)行細(xì)胞移植14d后大鼠創(chuàng)面局部及邊緣可見5-BrdU標(biāo)記的陽性細(xì)胞聚集,免疫組化染色可見基底層、真皮層、新生血管周圍有散在紅棕色標(biāo)記細(xì)胞;對(duì)照組中未發(fā)現(xiàn)明顯的聚集現(xiàn)象;抗5-BrdU/FⅧ、5-BrdU/波形蛋白
3、免疫雙標(biāo)技術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示:在創(chuàng)傷部位有部分BMSCs分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞參與創(chuàng)面愈合。大鼠對(duì)側(cè)正常皮膚中未見明顯的BMSCs聚集和增殖分化情況。 結(jié)論:創(chuàng)傷可作為一種刺激因素,招募自身或外源的MSCs參與皮膚創(chuàng)面的愈合。MSCs在創(chuàng)面微環(huán)境的作用下可能轉(zhuǎn)化為修復(fù)細(xì)胞,如血管內(nèi)皮細(xì)胞或(和)成纖維細(xì)胞等參與皮膚創(chuàng)面的修復(fù)。用5-BrdU標(biāo)記的BMSCs參與皮膚創(chuàng)面愈合。 第二部分:骨髓干細(xì)胞動(dòng)員對(duì)大鼠創(chuàng)面愈合的影
4、響 目的:探討骨髓干細(xì)胞動(dòng)員后在大鼠創(chuàng)面愈合中的作用。進(jìn)一步完善對(duì)創(chuàng)面愈合機(jī)制的認(rèn)識(shí),為促進(jìn)新的治療手段和策略提供理論依據(jù)。 方法:30只Wistar大鼠隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,兩組動(dòng)物均制作全層皮膚缺損模型。實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物建模后24 h開始皮下注射rhG-CSF(分泌型基因重組人粒細(xì)胞集落刺激因子)皮下注射20ug/kg,2次/d,連續(xù)注射7d;對(duì)照組建模后24小時(shí)開始皮下注射等量生理鹽水,連續(xù)注射7d。檢測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物外周血
5、骨髓干細(xì)胞動(dòng)員情況,觀察創(chuàng)傷后3d、7d、14d、21d、42d的創(chuàng)面,并用病理學(xué)方法對(duì)創(chuàng)面的修復(fù)質(zhì)量進(jìn)行評(píng)估。 結(jié)果:兩組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物骨髓干細(xì)胞動(dòng)員前外周血有核細(xì)胞計(jì)數(shù)與單個(gè)核細(xì)胞例近乎相等,差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物重組人粒細(xì)胞集落刺激因子皮下注射,外周血骨髓干細(xì)胞一般在5 d左右達(dá)到峰值,外周血有核細(xì)胞計(jì)數(shù)(4.8±0.4)×109/L,及單個(gè)核細(xì)胞比例(97.1±2.8)%明顯高于動(dòng)員前,同時(shí)亦明顯高于對(duì)照組,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)
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