抑癌候選基因NDRG2在淋巴瘤中的表達(dá)及意義.pdf

1、【背景】
　　淋巴瘤是一組起源于淋巴結(jié)或其他淋巴組織的惡性腫瘤，分為霍奇金病（簡稱HD）和非霍奇金淋巴瘤（簡稱NHL）兩大類，其中NHL又包括T細(xì)胞淋巴瘤、B細(xì)胞淋巴瘤和NK細(xì)胞淋巴瘤。NK/T細(xì)胞淋巴瘤是惡性淋巴瘤中的一種獨(dú)立的病種，其瘤細(xì)胞大部分來源于成熟的NK細(xì)胞,少部分來自NK樣T細(xì)胞,故稱為NK/T細(xì)胞淋巴瘤。近年來，對淋巴瘤發(fā)病的分子機(jī)制進(jìn)行了深入的研究，發(fā)現(xiàn)了一些參與淋巴瘤形成、發(fā)展的重要分子通路，主要包括：EB病毒

2、感染、多種信號途徑的異常活化以及多種抗凋亡機(jī)制的存在。
　　NDRG2(N-myc downstream regulated gene 2)是本研究組用錨定引物PCR方法從正常人腦cDNA文庫中克隆得到的一個新基因，基因庫登錄號為AF159092Hj。本研究組采用多種方法對其mRNA及組織分布表達(dá)進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)NDRG2在人體多種正常組織和器官均有不同程度的表達(dá)，而在相應(yīng)的腫瘤組織中低表達(dá)或不表達(dá)，提示NDRG2可能是一個抑癌基

3、因。近幾年來，NDRG2在胃癌、乳腺癌、肝癌等中表達(dá)的研究均有報道，本實驗結(jié)合淋巴瘤發(fā)病的分子機(jī)制闡述了NDRG2的可能作用，了解NDRG2在淋巴瘤中的表達(dá)情況，對闡明淋巴瘤的發(fā)病機(jī)制以及治療具有一定意義。
　　【目的】
　　1.探討NDRG2在不同淋巴瘤組織的表達(dá)情況及與臨床資料的關(guān)系；
　　2.探討NDRG2在淋巴瘤、正常、病變組織的表達(dá)情況。
　　【方法】
　　1.淋巴瘤組織芯片購于陜西超英生物公司，

4、芯片編號：CC15-17-001、CC15-19-003，其中淋巴瘤81例，36例為T細(xì)胞淋巴瘤，45例為B細(xì)胞淋巴瘤；淋巴結(jié)良性病變組織40例；淋巴結(jié)正常組織40例；
　　2．48例NK/T細(xì)胞淋巴瘤組織蠟塊來自西京醫(yī)院病理科，光鏡診斷為惡性淋巴瘤，按照2008年WHO淋巴瘤新的分類方法明確診斷為NK/T細(xì)胞淋巴瘤，診斷前均未做過任何放療或化療。根據(jù)AnnArbor分期可分為：Ⅰ期21例，Ⅱ期18例，Ⅲ期6例，Ⅳ期3例，其中男2

5、9例，女19例，平均年齡52.87±15.02歲，所有病人有完整臨床資料，4μm厚連續(xù)切片；
　　3．免疫組織化學(xué)染色法，具體操作按說明書進(jìn)行，常規(guī)二甲苯脫蠟水化，高壓修復(fù)抗原，甲醇封閉內(nèi)源性過氧化物酶，滴加小鼠抗NDRG2單克隆抗體(抗體稀釋度為1：75)，DAB顯色，蒸餾水洗終止顯色。以0.01mol/LPBS取代第一抗體進(jìn)行孵育作為空白對照；
　　4．NDRG2免疫反應(yīng)陽性產(chǎn)物的定量分析在密封片號的情況下，請西京醫(yī)院病

6、理醫(yī)師獨(dú)立在光學(xué)顯微鏡下對切片染色陽性情況進(jìn)行評估，選擇10個高倍視野進(jìn)行計數(shù)，根據(jù)染色程度和著色細(xì)胞百分率進(jìn)行半定量結(jié)果判定：胞質(zhì)基本不著色記0分，陽性細(xì)胞染淡黃色記1分，染棕黃色記2分，染棕褐色記3分；著色細(xì)胞占計數(shù)細(xì)胞百分率≤5％，記0分，5％～25％記1分，26％～50％記2分，50％～75％記3分，＞75％記4分，上述兩項得分乘積作為最后判斷結(jié)果：0分為陰性（-），1～4分為弱陽性表達(dá)（+），5～8分為中等強(qiáng)度表達(dá)（++），9

7、～12分為強(qiáng)陽性表達(dá)（+++）；
　　5.利用SPSS12.0軟件包對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料間比較采用卡方檢驗和精確概率法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＞0.05差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　【結(jié)果】
　　1．NERG2免疫反應(yīng)陽性產(chǎn)物呈棕褐色，定位于胞質(zhì)，胞核不著色。
　　2．統(tǒng)計結(jié)果顯示正常淋巴結(jié)，淋巴結(jié)良性病變及淋巴瘤組織中NDRG2的陽性表達(dá)率分別為92.5％(37/40)，67.5％(27/40)

8、，18.5％（15/81），三者相比具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　3.石蠟包埋NK/T細(xì)胞淋巴瘤組織中陽性表達(dá)率是6.2％（3/48）；組織芯片包含的B細(xì)胞淋巴瘤及T細(xì)胞淋巴瘤陽性表達(dá)率分別為13.3％(6/45)和25.0％(9/36)。經(jīng)過統(tǒng)計分析，P﹤0.05，三者相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義。NDRG2在NK/T細(xì)胞淋巴瘤的陽性率要低于B細(xì)胞淋巴瘤和T細(xì)胞淋巴瘤。
　　4.NDRG2的表達(dá)水平與NK/T細(xì)胞淋巴瘤病人