NDRG2在肝癌熱化療中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、NDRG2基因（N-mycdown-streamregulatedgene2，又名SYLD或KIAA1248）是我校生化實(shí)驗(yàn)室首先發(fā)現(xiàn)的一個(gè)新基因。目前對于NDRG2相關(guān)功能的研究發(fā)現(xiàn)，NDRG2不僅參與組織胚胎的發(fā)育和細(xì)胞的分化過程，還可以參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸，起到抑癌候選基因的作用。更為重要的是，研究發(fā)現(xiàn)，NDRG2還可能與細(xì)胞的多種應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)，在細(xì)胞應(yīng)對外來應(yīng)激的過程中發(fā)揮重要作用。熱應(yīng)激是一種常見的應(yīng)激反應(yīng)，并已應(yīng)用于腫

2、瘤的臨床治療，即腫瘤熱療。阿霉素（ADM）是治療原發(fā)性肝癌的化療藥物之一，但其應(yīng)用受到一定限制，一方面由于其療效，另一方面由于其毒副反應(yīng)。已有大量研究證實(shí)，熱療與放療或化療聯(lián)合應(yīng)用均具有更好的療效，而且可以減少放化療的劑量，從而減少了毒副作用的發(fā)生。但是其中的分子機(jī)制尚不清楚。前期研究發(fā)現(xiàn)，在缺氧和熱作用下，NDRG2蛋白可發(fā)生從胞質(zhì)到胞核內(nèi)轉(zhuǎn)位，將不同NDRG2片段轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后，可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。因此，我們有理由推測NDRG2可能在熱

3、化療中發(fā)揮重要功能，特別是與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)，本課題將對此進(jìn)行探討和驗(yàn)證。
　　我們以肝癌細(xì)胞系HHCC、HepG2為研究對象，將細(xì)胞隨機(jī)分為四組，分別為（對照組），熱療組（42℃水?。熃M（ADM處理），熱化療組（42℃水浴聯(lián)合ADM處理）。首先應(yīng)用MTT實(shí)驗(yàn)測定了ADM工作濃度及加熱時(shí)間，后續(xù)實(shí)驗(yàn)均以阿霉素工作濃度1mg/ml，加熱時(shí)間為1h進(jìn)行。MTT實(shí)驗(yàn)檢測到熱療、化療和熱化療組對HHCC細(xì)胞的增殖抑制率（％）分別為：

4、（23.18±0.81）、（38.35±2.23）、（65.77±2.54）；對HepG2細(xì)胞的增殖抑制率（％）分別為：（17.12±2.86）、30.35±5.90）、（74.25±1.53）。熱化療組細(xì)胞增殖抑制率與同種細(xì)胞單純熱療或化療組相比，有顯著性差異（P＜0.05）。流式細(xì)胞儀檢測到熱療、化療與熱化療組對HHCC細(xì)胞的凋亡率（％）分別為：(23.83±1.76)、(45.57±2.81)、（76.1±2.33）；HepG2細(xì)

5、胞凋亡率（％）分別為：（19.7±7.63）、（37.43±1.88）、（76.9±2.79）。熱化療組的細(xì)胞凋亡率與同種細(xì)胞單純熱療或阿霉素化療組相比，具有顯著性差異（P＜0.05）。并且熱療與化療聯(lián)合具有協(xié)同作用。同時(shí)用WesternBlot方法檢測了NDRG2在肝癌細(xì)胞HHCC熱化療中的表達(dá)變化。HHCC細(xì)胞中NDRG2表達(dá)水平在熱應(yīng)激后表達(dá)水平明顯降低。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示NDRG2與熱應(yīng)激存在一定的聯(lián)系。
　　我們進(jìn)一步在HHC

6、C細(xì)胞系中構(gòu)建了NDRG2過表達(dá)及干涉表達(dá)的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系，應(yīng)用MTT實(shí)驗(yàn)及流式細(xì)胞術(shù)和電鏡技術(shù)檢測了NDRG2過表達(dá)及干涉表達(dá)后各組細(xì)胞增殖率及凋亡率的變化，并對其機(jī)制進(jìn)行研究。我們的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：NDRG2過表達(dá)后肝癌細(xì)胞的增殖受到抑制，凋亡率明顯減少，并伴隨著Bax、Bax/Bcl-2表達(dá)水平降低；相反，干涉NDRG2表達(dá)后細(xì)胞增殖增加，細(xì)胞凋亡增多，同時(shí)伴隨Bax、Bax/Bcl-2表達(dá)水平升高。
　　綜上所述，我們首次探討了