星形膠質(zhì)細胞NDRG2在七氟烷預(yù)處理神經(jīng)保護作用中的機制研究.pdf

1、目的：大量在體研究和離體研究均表明，常用吸入性麻醉藥七氟烷預(yù)處理可誘導(dǎo)腦缺血耐受，減輕腦缺血再灌注損傷，但其機制尚未完全明了。N-myc下游調(diào)節(jié)基因2（N-myc downstream regulated gene2，NDRG2）是一個在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)主要表達于星形膠質(zhì)細胞的基因，與細胞增殖、分化、應(yīng)激等功能密切相關(guān)。我們前期工作發(fā)現(xiàn)，局灶性腦缺血再灌注損傷后缺血半暗帶區(qū)NDRG2發(fā)生了時間和空間上的表達變化，且參與了缺血再灌注損傷后

2、p53介導(dǎo)的細胞凋亡過程。本研究旨在從在體和離體兩方面探討 NDRG2及其介導(dǎo)的細胞凋亡和星形膠質(zhì)細胞功能改變在七氟烷預(yù)處理神經(jīng)保護效應(yīng)中的作用及機制。
　　方法：在體—健康雄性成年SD大鼠，2％七氟烷預(yù)處理1h，預(yù)處理結(jié)束2h后行大腦中動脈阻閉（middle cerebral artery occlusion，MCAO）誘導(dǎo)局灶性腦缺血，缺血120min后抽出線栓恢復(fù)灌注。再灌注24 h依據(jù)Garcia評分標準評估神經(jīng)功能，并行

3、TTC（2,3,5-triphenyltetrazolium chloride，2，3，5-氯化三苯基四氮唑）染色計算腦梗死容積百分比，采用Western Blot、real-timePCR、免疫熒光染色、TUNEL（transferase-mediated deoxyuridine triphosphate-biotin nick end labeling，轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的三磷酸脫氧鳥苷-生物素末端標記）染色等測定缺血半暗帶區(qū) NDRG2

4、表達、分布和細胞凋亡情況。離體—取新生 SD鼠的大腦皮層培養(yǎng)原代星形膠質(zhì)細胞，采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法向細胞內(nèi)轉(zhuǎn)染NDRG2 siRNA或NDRG2過表達質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染24h給予2％七氟烷預(yù)處理1h，預(yù)處理結(jié)束2h后進行氧糖剝奪（oxygen-glucose deprivation，OGD）4h，復(fù)氧24h檢測細胞活力（MTT試驗）、細胞毒性（LDH釋放率）、凋亡情況（TUNEL染色、活化Caspase-3表達）以及NDRG2表達變化。
　　

5、結(jié)果：七氟烷預(yù)處理顯著降低了局灶性腦缺血再灌注引起的大鼠神經(jīng)功能損傷和腦梗死容積，減少了缺血半暗帶組織TUNEL染色陽性細胞數(shù)目和活化Caspase-3表達量，抑制了缺血后NDRG2上調(diào)和核轉(zhuǎn)移現(xiàn)象（P<0.05）。原代培養(yǎng)星形膠質(zhì)細胞OGD模型中得到了類似的結(jié)果。采用NDRG siRNA降低原代培養(yǎng)星形膠質(zhì)細胞中NDRG2表達可增加細胞活力，減輕氧糖剝奪引起的LDH（lactate dehydrogenase，乳酸脫氫酶）釋放，降低T

6、UNEL陽性細胞數(shù)和活化Caspase-3表達（P<0.05）;而轉(zhuǎn)染NDRG2過表達質(zhì)粒使原代培養(yǎng)星形膠質(zhì)細胞中 NDRG2上調(diào)則可部分逆轉(zhuǎn)七氟烷預(yù)處理減輕氧糖剝奪損傷的作用（P<0.05）。
　　結(jié)論：七氟烷預(yù)處理可通過抑制腦組織星形膠質(zhì)細胞內(nèi) NDRG2的表達和活性，減輕細胞凋亡，改善星形膠質(zhì)細胞功能，從而減輕腦缺血再灌注損傷。本研究為七氟烷預(yù)處理可能的臨床應(yīng)用提供了可靠的理論支持，也為開發(fā)新的腦缺血損傷防治措施提供了新的靶