差異蛋白質(zhì)組學(xué)在Poly(I-C)誘導(dǎo)的大黃魚肝臟中的研究及兩種免疫相關(guān)基因的克隆和鑒定.pdf

1、大黃魚(Pseudosciana crocea)是我國特有的經(jīng)濟魚種,以其味道鮮美,營養(yǎng)豐富和極高的藥用價值而受到青睞,在大黃魚人工育苗和網(wǎng)箱養(yǎng)殖等技術(shù)相繼成熟之后,人工養(yǎng)殖得到迅猛發(fā)展。由于養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴大和養(yǎng)殖環(huán)境日益惡化,導(dǎo)致大面積病毒性疾病的爆發(fā),給大黃魚的養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的損失。在本研究中,我們利用蛋白質(zhì)組學(xué)的高通量高分辨力對對照組和Poly(I:C)注射組的大黃魚肝臟樣品做進一步研究,旨在從分子水平角度對魚類的抗病機制做初

2、步的探索。通過比較對照組和注射組肝臟樣品的雙向電泳圖譜,我們在肝臟樣品找到30個差異點,并利用MALDI-TOF-MS做肽質(zhì)量指紋圖譜分析,進一步對其中16個差異點做串聯(lián)質(zhì)譜MALDI-TOF-TOF分析,得到了13個點的肽段。在對大黃魚抗病機制的研究中,我們查詢這些差異點的功能發(fā)現(xiàn),有13.3％的差異點是免疫相關(guān)蛋白,40％的差異點是代謝酶類,10％的差異點是調(diào)控蛋白類,13.3％的差異點是轉(zhuǎn)錄/翻譯蛋白類,13.3％的差異點是結(jié)構(gòu)蛋

3、白類,10％的差異點功能未知。
　　 在人的細胞中,干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白1是一個蛋白復(fù)合物的組分,該復(fù)合物與同型粘連和抗增殖信號的轉(zhuǎn)換密切相關(guān)。在本研究中,克隆了大黃魚IFITM1基因全長734個核苷酸的cDNA序列,它編碼124個氨基酸的蛋白,分子量為13.6 KD。推測的蛋白與哺乳動物和魚類已知的干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白有較高的同源性,并且有IFITM典型的結(jié)構(gòu)特征,包括兩個保守的跨膜區(qū)和它們之間的胞內(nèi)區(qū),一個位于胞內(nèi)區(qū)的保守的PK

4、C磷酸化位點(aa65-67,SIR)。進化分析顯示LycIFITM1與魚類IFITM形成獨立一支。組織表達分布研究顯示LycIFITM1基因在所檢測的所有組織中都有表達,包括腸、鰓、心、肌、脾、肝、血和腎。經(jīng)Poly(I:C)誘導(dǎo)24小時后IFITM1在鰓、腎、心和脾中表達明顯上調(diào),揭示LycIFITM1可能與Poly(I:C)刺激產(chǎn)生的免疫反應(yīng)有關(guān)。,熒光定量PCR結(jié)果顯示:在Poly(I:C)刺激下LycIFITM1的mRNA在脾

5、臟和腎臟的轉(zhuǎn)錄水平都在24小時達到最高,分別是正常水平的48.7和280.4倍。以上結(jié)果說明LycIFITM1基因是魚類IFITM家族的成員。
　　 在本研究中,克隆了大黃魚CXCL12基因全長678個核苷酸的cDNA序列,它編碼97個氨基酸的蛋白,分子量為11.1KD,包含一個22個氨基酸的信號肽和75個氨基酸的成熟肽。四個半胱氨酸殘基是CXC趨化因子空間結(jié)構(gòu)和功能所必需的,LycCXCL12蛋白含有這4個保守的半胱氨酸殘基(

6、在第31,33,56和71位)。推斷的蛋白和其他已知的魚類CXCL12趨化因子有57％-68％的同源性,和其他脊椎動物有32％-36％的同源性。進化分析顯示LycCXCL12和CXCL12亞族的關(guān)系最近。組織表達分布研究顯示LycCXCL12基因在所檢測的所有組織中都有表達,包括腸、鰓、心、肌、脾、肝、血和腎。經(jīng)Poly(I:C)和三聯(lián)滅活細菌疫苗誘導(dǎo)24小時后,LycCXCL12基因在鰓、肝、腎、血和脾中表達明顯上調(diào),三聯(lián)疫苗刺激引起