洋蔥轉(zhuǎn)脂蛋白的鈣調(diào)素結(jié)合活性及抗真菌活性分析.pdf

1、鈣調(diào)素 (calmodulin，CaM) 是Ca<'2+>信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)中極其重要的組成部分，其功能通過與各種鈣調(diào)素結(jié)合蛋白(calmodulin binding protein，CaMBP)的相互作用而實(shí)現(xiàn)。CaMBP-10 為本研究組近年在中國大白菜中發(fā)現(xiàn)并分離到的一種新的具有重要生理意義的鈣調(diào)素內(nèi)源結(jié)合蛋白，同時(shí)確認(rèn)它是植物非特異性轉(zhuǎn)脂蛋白家族(nsLTPs)中的新成員，首次將CaM和nsLXPs聯(lián)系到一起。近期研究證明，除CaMB

2、P-10外擬南芥和玉米的nsLTP均能與CaM結(jié)合。這說明nsLTP可能是一類新的CaM結(jié)合蛋白。 為了進(jìn)一步了解植物非特異性轉(zhuǎn)脂蛋白與鈣調(diào)素的相互作用，我們構(gòu)建了一系列CaMBP-10的單點(diǎn)及多點(diǎn)突變體蛋白，并對(duì)其進(jìn)行了鈣調(diào)素結(jié)合活性分析，結(jié)果表明CaMBP-10與鈣調(diào)素的結(jié)合依賴于其C末端CaM結(jié)合結(jié)構(gòu)域中的的四個(gè)堿性氨基酸。另外，我們克隆并表達(dá)了洋蔥非特異性轉(zhuǎn)脂蛋白 Ace-AMP1，凝膠覆蓋分析表明其具有與CaMBP-1

3、0相同的CaM結(jié)合特性，進(jìn)一步分析表明，Ace-AMP1 的鈣調(diào)素結(jié)合結(jié)構(gòu)域位于其分子中43位到62位氨基酸殘基之間，并且其鈣調(diào)素結(jié)合活性與該區(qū)域內(nèi)的四個(gè)堿性氨基酸直接相關(guān)。此外，我們對(duì)重組Ace-AMP1進(jìn)行了體外抗真菌活性分析，結(jié)果表明其對(duì)以香蕉炭疽為代表的真菌有極為明顯的抑制作用，半數(shù)抑制濃度在1.5ug/ml左右。我們還構(gòu)建了Ace-AMP1的一個(gè)雙點(diǎn)突變體，而該突變體對(duì)香蕉炭疽的抑制作用明顯減弱。 以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果為進(jìn)一步