雞腿菇（Coprinus comatus）漆酶的誘導及cDNA克隆.pdf

1、漆酶是一種銅多酚氧化酶，主要存在于白腐菌中，是一種分泌至胞外的糖蛋白。漆酶可以降解木質素和氧化酚類、芳胺類化合物，有著廣泛的用途。雞腿菇是一種能高效分泌漆酶的白腐菌。 本論文首先研究了雞腿菇在25℃、四種不同培養(yǎng)基中進行液體靜置培養(yǎng)時，漆酶活力的比較。研究表明A培養(yǎng)基(碳源為葡萄糖，氮源為酵母浸膏)的雞腿菇漆酶活性最高。后續(xù)實驗研究了不同的金屬離子和芳香族化合物對漆酶產酶的影響。結果顯示添加濃度為0.8mmol/L的錳離子和3

2、.0mmol/L的咖啡酸對雞腿菇漆酶的誘導作用最明顯。其它的化學試劑分別在不同的濃度表現出誘導作用。其中在低濃度表現出最佳誘導作用的是4-甲氧基肉桂酸、茴香酸、3，4，5-三甲氧基肉桂酸、愈創(chuàng)木酚、3，5-二甲氧基-4-羥基肉桂酸、香蘭素、3-(4-甲氧苯基)-丙酸。而Cu2+、3，4-二甲氧基苯甲醛、肉桂酸、4-羥基肉桂酸、3-(4-羥基苯基)-丙酸則在高濃度時誘導效果最好。對碳源和氮源的研究表明最佳碳源是葡萄糖，最佳氮源是蛋白胨。通

3、過不連續(xù)聚丙酰烯酰胺凝膠電泳分析發(fā)現，不同種類、濃度的化學試劑會誘導產生不同的雞腿菇漆酶的同工酶，由于這些同工酶具有不同的等電點所以電泳中表現出不同的譜帶。漆酶最適反應pH值和溫度為6.0和60℃。 本論文實驗還從雞腿菇中提取mRNA，反轉錄得到cDNA序列，再根據真菌漆酶蛋白質家族的保守氨基酸結構域設計一系列簡并性引物，進行PCR擴增得到143bp的雞腿菇漆酶特異性基因片段。再利用BLAST。程序將該序列與NCBI數據庫中的