自體PRP對周圍神經(jīng)斷裂再生修復(fù)微環(huán)境影響的實驗研究.pdf

1、目的：通過對周圍神經(jīng)斷裂動物模型的建立，用制備的自體富血小板血漿(platelet-rich plasma，PRP)在不同時間點(diǎn)種植于損傷的周圍神經(jīng)局部，研究PRP對周圍神經(jīng)斷裂縫合后局部微環(huán)境變化的影響。分析周圍神經(jīng)再生修復(fù)與局部微環(huán)境參數(shù)VEG、IGF-1等是否存在量變關(guān)系，觀察不同時段分次局部給予PRP對周圍神經(jīng)的再生修復(fù)是否會產(chǎn)生持續(xù)的誘導(dǎo)、促進(jìn)作用，并用宏觀、微觀及生化等指標(biāo)驗證PRP對治療周圍神經(jīng)損傷的可行性，分析其可能存在

2、的原理及機(jī)制。為周圍神經(jīng)損傷尋找一種合理、經(jīng)濟(jì)、有效、操作便利的治療方法。
　　方法：1.選取同產(chǎn)地、月齡與體重相當(dāng)?shù)男挛魈m大白兔48只，雌雄不限。隨機(jī)分成四組，A組（假手術(shù)組）、B組（NS組）、C組（S-PRP組）、D組（T-PRP組）。2.動物模型建立：2.1先C、D兩組每只實驗大白兔用帶抗凝劑的注射器抽取耳緣靜脈血，用Landesberg兩次離心法制備 PRP，進(jìn)行血小板檢測。2.2全部實驗動物：無菌操作，實驗兔解剖坐骨神經(jīng)

3、，A組只做暴露，B、C、D組于梨狀肌下緣約1.5cm完全切斷，再用8-0顯微縫線均勻縫合4針。2.3 B組在神經(jīng)縫合斷端及周圍注入生理鹽水（NS）0.4ml，C、D組在神經(jīng)縫合斷端及周圍注入PRP0.4ml（C、D組于手術(shù)前同上述方法制備PRP備用），縫合術(shù)口。術(shù)后大白兔非實驗側(cè)臀部肌注抗生素預(yù)防感染處理3天，限制部分活動，相同生存環(huán)境及飼養(yǎng)方法。3.分別術(shù)后每周相同時間，在超聲引導(dǎo)下，B組在坐骨神經(jīng)縫合口周緣注射0.4ml NS，D組

4、在坐骨神經(jīng)縫合口周緣注射0.4ml PRP（其中D組均術(shù)前抽取全血，制備PRP待用）。4.觀察指標(biāo)：4.1術(shù)后12周，同造模方法解剖所有動物坐骨神經(jīng)，進(jìn)行電生理檢測。4.2電生理測量完畢，切取坐骨神經(jīng)斷裂縫合處神經(jīng)段，縱行剖開，其中1/2做標(biāo)本固定、包埋，制作切片，光鏡觀察神經(jīng)軸突再生情況；并做免疫組化染色，觀察S-100蛋白表達(dá)情況，記錄施旺細(xì)胞活性。4.3另外1/2神經(jīng)段做Western Blot記錄VEGF、IGF-1表達(dá)結(jié)果。4

5、.4手術(shù)分離腓腸肌，切取約0.1g肌肉組織進(jìn)行AChE含量檢測。5. SPSS24.0統(tǒng)計軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。6.實驗標(biāo)準(zhǔn)參考國際或國內(nèi)權(quán)威機(jī)構(gòu)的相關(guān)文書。
　　結(jié)果：1.靜脈全血中血小板平均濃度為304.87×109/L，PRP中平均血小板濃度為1336.42×109/L，PRP中血小板計數(shù)為全血中的4.38倍。2.術(shù)后12周坐骨神經(jīng)動作電位（CNAP）在T-PRP組恢復(fù)優(yōu)于NS組和S-PRP組,且有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.0

6、5）。3.在術(shù)后12周神經(jīng)縫合處的細(xì)胞因子VEGF和IGF-1在各組均為陽性，統(tǒng)計結(jié)果顯示VEGF和IGF-1積分光密度值在T-PRP組明顯高于其他三組，且有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。4.術(shù)后12周,假手術(shù)組及T-PRP組坐骨神經(jīng)斷裂側(cè)腓腸肌中AChE含量明顯高于NS組和S-PRP組,有非常顯著性差異(P<0.01)；NS組與S-PRP組無顯著性差異(P>0.05)；T-PRP組明顯高于NS組，組間具有顯著性差異(P<0.01)。5.

7、術(shù)后12周坐骨神經(jīng)組織中,假手術(shù)組、NS組和S-PRP組神經(jīng)組織內(nèi)S-100蛋白含量明顯低于T-PRP組,有非常顯著性差異(P<0.01)；NS組與S-PRP組無顯著性差異(P>0.05)。
　　結(jié)論：1.在兔坐骨神經(jīng)斷裂局部時間點(diǎn)多次應(yīng)用PRP可增加坐骨神經(jīng)局部微環(huán)境參數(shù)VEGF、IGF-1的含量，以及促進(jìn)施旺細(xì)胞的分裂增殖。2.多頻次神經(jīng)斷裂區(qū)注射PRP，能促進(jìn)膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)ACh的合成和釋放，可增強(qiáng)周圍神經(jīng)損傷后運(yùn)動終板的修