P物質(zhì)調(diào)控肥大細(xì)胞脫顆粒的一種新的機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　利用體外誘導(dǎo)小鼠骨髓細(xì)胞獲得的高純度肥大細(xì)胞，探討IL-4參與誘導(dǎo)獲得的肥大細(xì)胞NK-1R和FcεRⅠα的表達(dá)情況；建立神經(jīng)肽P物質(zhì)介導(dǎo)的肥大細(xì)胞脫顆粒模型，初步探討P物質(zhì)除通過其特異受體NK-1R調(diào)控肥大細(xì)胞脫顆粒外是否還存在FcεRⅠα介導(dǎo)的途徑。
　　方法：
　　1.從Balb/c小鼠股骨提取骨髓細(xì)胞，分不同濃度IL-4誘導(dǎo)組即100ng/ml干細(xì)胞因子（stem cell factor，SCF）、1

2、5ng/ml IL-3以及0，10,15,20,25ng/ml IL-4進(jìn)行體外培養(yǎng)。每周換液，將懸浮細(xì)胞移入新的培養(yǎng)體系。倒置顯微鏡觀察并記錄細(xì)胞生長情況。
　　2.四周后收集各組細(xì)胞及上清液，進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD117鑒定肥大細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)以及Western Blotting分析不同組骨髓肥大細(xì)胞FcεRⅠα和NK-1R表達(dá)情況。
　　3.經(jīng)鑒定培養(yǎng)成功的骨髓肥大細(xì)胞中分別加入不同濃度P物質(zhì)（0、0.0

3、1、0.1、1、10μg/ml）孵育半小時(shí)，檢測(cè)上清液和細(xì)胞內(nèi)組胺含量，計(jì)算組胺釋放率。
　　結(jié)果：
　　1.不同濃度IL-4誘導(dǎo)組（100ng/ml SCF、15ng/ml IL-3以及0，10,15,20,25ng/ml IL-4）均可誘導(dǎo)獲得肥大細(xì)胞。
　　2.其中SCF、IL-3和IL-4共同誘導(dǎo)組獲得的肥大細(xì)胞FcεRⅠα和NK-1R的表達(dá)高于單純SCF和IL-3組（0 ng/ml IL-4誘導(dǎo)組）；而20n

4、g/mlIL-4誘導(dǎo)組肥大細(xì)胞表面FcεRⅠα和NK-1R表達(dá)達(dá)最佳狀態(tài)。
　　3.20ng/mlIL-4誘導(dǎo)組肥大細(xì)胞可被低濃度P物質(zhì)（0.01μg/ml）激活進(jìn)而發(fā)生脫顆粒，其組胺釋放率與SP濃度呈正相關(guān)；0 ng/ml IL-4誘導(dǎo)組肥大細(xì)胞表達(dá)FcεRⅠα但是幾乎不表達(dá)NK-1R，此時(shí)在高濃度SP（1μg/ml）作用時(shí)肥大細(xì)胞仍可產(chǎn)生應(yīng)答。
　　結(jié)論：
　　初步驗(yàn)證P物質(zhì)調(diào)控肥大細(xì)胞脫顆粒存在其特異受體NK-1