剪切作用下的肥大細胞內鈣信號和脫顆粒研究.pdf

1、傳統(tǒng)針刺過程中均伴隨有提插捻轉等手法，如果單純留針而不做手法，針刺效果則不佳。這些手法實質上是提供一個剪切作用，而不僅僅是留針的靜壓力。但在中醫(yī)里，對于針刺的手法定義都很模糊，需要進行科學定量的界定才有利于進一步研究。在針灸作用機理研究中，肥大細胞受到很多人的關注。既往的研究發(fā)現，穴位點有大量的肥大細胞和鈣元素的富集，當針刺穴位點時，觀察到肥大細胞脫顆粒增加，而在針刺鎮(zhèn)痛的大鼠實驗中，當以色苷酸鈉阻斷了肥大細胞脫顆粒時，鎮(zhèn)痛作用減弱，這

2、些均表明，肥大細胞和鈣與針灸作用間存在著聯系。因此，我們著眼于剪切刺激對于肥大細胞內的鈣和脫顆粒的影響。
　　利用掃描共聚焦熒光顯微鏡方法，研究了剪切應力作用對RBL-2H3肥大細胞胞內鈣離子濃度的影響。細胞用Fluo-3/AM熒光標記細胞內的鈣，鈣濃度越大，熒光強度越強。肥大細胞外的Ca2+濃度較細胞內高，但細胞膜上的Ca2+泵可以泵出鈣離子，阻止Ca2+通過滲透作用進入細胞內。既往實驗[1]表明用剪切刺激能夠促使細胞膜上鈣離子

3、通道打開，從而使細胞外的Ca2+進入細胞內，增大細胞內Ca2+濃度。Ca2+濃度提高會導致脫顆粒，脫落到細胞外顆粒的主要成分是組織胺和白介素等。已有實驗表明，脫顆粒與提高痛閾有關，能達到針灸治療的效果。而我們在試驗中發(fā)現在步進電機轉子帶動的流體剪切力作用下，肥大細胞內的鈣熒光根據剪切力的大小呈現振蕩態(tài)和穩(wěn)定態(tài)。并且剪切作用下，細胞熒光振蕩的頻率大于非剪切作用下的頻率，說明剪切刺激有利于細胞的鈣離子振蕩。
　　另外，我們建立了肥大細

4、胞對剪切刺激的細胞內鈣離子和脫顆粒的動力學模型。細胞胞液內的鈣離子流量由四部分組成:鈣庫上的受體通道打開，使得鈣離子由鈣庫進入胞液內;細胞膜上的鈣離子通道打開，胞外流入胞內;鈣庫和細胞膜上的鈣泵打開，使得胞液的鈣離子又分別流到鈣庫內和細胞胞液外。剪切應力轉換成剪切能量密度使得細胞膜上的離子通道打開，提高離子通道打開的幾率。通過計算我們發(fā)現在同樣的條件下，不同的剪切力會導致胞液內的鈣離子濃度會有振蕩和穩(wěn)態(tài)兩種情況。在振蕩情況下，一定程度增