乙醇對大鼠離體大腦中動脈肌張力的作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　觀察不同濃度的乙醇對大鼠離體大腦中動脈血管環(huán)（MCA）靜息肌張力的影響；在大鼠離體MCA上，觀察乙醇對血管收縮劑血栓素A2類似物（U46619）、39mmol/L KCl、內(nèi)皮素（endothelin, ET）引起收縮作用的影響；觀察在U46619預(yù)收縮基礎(chǔ)上，乙醇所致大鼠離體MCA肌源性反應(yīng)與絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）、細(xì)胞外鈣內(nèi)流和內(nèi)鈣釋放的關(guān)系。
　　方法:
　　1.大鼠離體MCA的制作：取青年雄

2、性大鼠（220g~250g），斷頭處死，立即取出腦組織并置于4℃的正常生理鹽水營養(yǎng)液（PSS）中，在顯微鏡下，急性分離出大鼠MCA二級分支，剪成約2mm的動脈環(huán)，固定于DMT上，通過PowerLab微血管環(huán)張力記錄系統(tǒng)，觀察不同濃度乙醇（0.1％~1.0%）對大鼠離體MCA靜息張力的影響。為便于比較，數(shù)據(jù)以60mmol/L KCl對該MCA的最大收縮幅度為100%。
　　2.觀察在U46619（3.0×10-7mol/L）、KCl

3、（39mmol/L）、ET（1.0×10-9mol/L）預(yù)收縮基礎(chǔ)上，0.1%、0.3%、1.0%濃度的乙醇對大鼠離體MCA的收縮作用。
　　3.觀察在U46619（3.0×10-7mol/L）預(yù)收縮基礎(chǔ)上，L-型電壓依賴性鈣通道（LVGC）阻斷劑硝苯地平（nifedipine, Nif）（3.0×10-7mol/L）、細(xì)胞外CaC12（2.5mmol/L）、p38絲裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）抑制劑SB239063（3.0

4、×10-6mol/L）、細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK）抑制劑PD98059（3.0×10-6mol/L）對不同濃度乙醇所致大鼠離體MCA收縮作用的影響。
　　結(jié)果：
　　1.乙醇對大鼠離體MCA靜息張力的作用
　　在靜息狀態(tài)下，0.1%、0.3%、1.0%濃度的乙醇對大鼠離體MCA基礎(chǔ)張力的收縮幅度絕對值為（0.04±0.06）mN、（0.08±0.08）mN、（0.10±0.08）mN，分別相當(dāng)于60mmol/L KC

5、l的（0.93±1.40）%、（1.84±1.66）%、（2.23±1.80）%，與對照組相比，統(tǒng)計學(xué)無明顯差異（P>0.05）。
　　2.乙醇對預(yù)收縮基礎(chǔ)上大鼠離體MCA的收縮作用
　　在靜息狀態(tài)下，U46619（3.0×10-7mol/L）、KCl（39mmol/L）、ET（3.0×10-9mol/L）對MCA的收縮幅度絕對值為（1.47±0.42）mN、（1.83±0.80）mN、（0.69±0.50） mN，分別相當(dāng)

6、于60mmol/L KCl的（26.12±6.95）%、（24.66±8.94）%、（13.29±4.86）%。在此基礎(chǔ)上，乙醇濃度依賴性的增強(qiáng)U46619、KCl、ET引起的MCA的收縮，其收縮幅度Emax值為（5.2±2.06）mN、（3.83±2.30）mN、（2.91±1.28）mN，分別相當(dāng)于60mmol/L KCl的（87.33±3.0）%、（47.33±10.24）%、（60.91±6.13）%。與單純乙醇對大鼠離體MCA

7、收縮作用相比較，在U46619、KCl、ET預(yù)收縮基礎(chǔ)上，乙醇收縮MCA的作用顯著增強(qiáng)，其統(tǒng)計學(xué)有差異意義（P<0.05）。
　　3.在U46619預(yù)收縮基礎(chǔ)上，乙醇所致大鼠離體MCA的收縮作用與細(xì)胞外鈣內(nèi)流和內(nèi)鈣釋放的關(guān)系
　　(1)在靜息狀態(tài)下，U46619（3.0×10-7mol/L）對大鼠離體MCA的收縮幅度絕對值為（1.53±0.35）mN，相當(dāng)于60mmol/L KCl的（30.08±5.60）%。在此基礎(chǔ)上，0

8、.1%、0.3%、1.0%的乙醇可以濃度依賴性的增強(qiáng)MCA的收縮，其收縮幅度絕對值為（0.96±0.40）mN、（2.04±0.86）mN、（4.56±1.64）mN，分別相當(dāng)于60mmol/L KCl的（17.96±4.03）%、（37.57±4.05）%、（85.16±5.67）%。預(yù)孵Nif（1.0×10-7mol/L）時，可以抑制0.1%、0.3%、1.0%的乙醇對大鼠離體MCA的收縮作用（P<0.05），其收縮百分比分別是（2

9、.25±2.79）%、（16.78±2.59）%、（65.13±7.98）%。
　　(2)在無鈣液中，U46619（3.0×10-7mol/L）引起大鼠離體MCA發(fā)生一定程度的收縮，其收縮幅度絕對值為（0.19±0.10）mN，加入2.5mmol/L CaC12后，MCA發(fā)生進(jìn)一步收縮，其收縮幅度絕對值達(dá)到（1.31±0.44）mN。預(yù)孵1.0%的乙醇時，對無鈣液中U46619引起的MCA的收縮作用無顯著的增強(qiáng)作用（P>0.05）

10、，但是對2.5mmol/L CaC12引起的收縮有加強(qiáng)作用（P<0.05），其Emax值為（3.21±1.43）mN。
　　4.在U46619預(yù)收縮基礎(chǔ)上，MAPK對乙醇所致離體MCA的收縮作用的影響
　　(1)在靜息狀態(tài)下， U46619（3.0×10-7mol/L）對大鼠離體MCA的收縮幅度為（1.49±0.37）mN，相當(dāng)于60mmol/L KCl的（27.44±2.78）%。在此基礎(chǔ)上，0.1%、0.3%、1.0%的

11、乙醇可以濃度依賴性的增強(qiáng)MCA的收縮，其收縮幅度絕對值為（0.97±0.30）mN、（2.00±0.70）mN、（4.73±1.41）mN，分別相當(dāng)于60mmol/L KCl的（17.53±1.28）%、（36.18±2.98）%、（85.60±3.41）%。預(yù)孵SB239063（3.0×10-6mol/L）時，可以抑制0.1%、0.3%、1.0%的乙醇對大鼠離體MCA的收縮作用（P<0.05），其收縮百分比分別是（3.98±1.02）

12、%、（17.85±2.96）%、（70.03±5.43）%。
　　(2)在靜息狀態(tài)下， U46619（3.0×10-7mol/L）對大鼠離體MCA的收縮幅度為（1.44±0.66）mN，相當(dāng)于60mmol/L KCl的（28.25±1.74）%。在此基礎(chǔ)上，0.1%、0.3%、1.0%的乙醇可以濃度依賴性的增強(qiáng)MCA的收縮，其收縮幅度絕對值為（1.03±0.44）mN、（2.09±0.98）mN、（4.50±2.17）mN，分別相

13、當(dāng)于60mmol/L KCll的（20.18±2.67）%、（40.38±4.23）%、（86.58±4.95）%。預(yù)孵PD98059（3.0×10-6mol/L）時，可以抑制0.1%、0.3%、1.0%的乙醇對大鼠離體MCA的收縮作用（P<0.05），其收縮百分比分別是（6.36±1.62）%、（22.00±4.45）%、（49.65±5.68）%。
　　結(jié)論：
　　單純乙醇本身對大鼠離體MCA有較弱的收縮作用，但在縮血管